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Biologische Beschreibung
| Spezifität | SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15] weist endogene Spiegel des gesamten SLC22A2/OCT2-Proteins nach. |
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| Hintergrund | SLC22A2, auch bekannt als Organic Cation Transporter 2 (OCT2), ist ein polyspezifischer erleichterter Transporter (~63 kDa) aus der SLC22-Familie. OCT2 wird überwiegend auf der basolateralen Membran von Nierentubuluszellen exprimiert und weist 12 transmembran-spannende Domänen auf, die eine nach innen gerichtete Substratbindungsvertiefung bilden. Es besitzt eine große extrazelluläre Schleife 2, die Glykosylierungsstellen für die Konformationsstabilität enthält, und Schlüsselreste wie Asp449 und Trp222 sind entscheidend für die Kationenerkennung und die Steuerung von Protonierungszuständen während des Transports. OCT2 arbeitet über einen alternierenden Zugangsmechanismus, der den elektrochemischen Gradienten (typischerweise -50 bis -70 mV) nutzt, ohne ATP oder Na⁺-Kopplung zu erfordern. Dieser Transporter bewegt organische Kationen, einschließlich Metformin, Cisplatin, Histamin, Dopamin und Kreatinin, bidirektional, mit einer vorwiegenden Rolle bei der basolateralen Aufnahme in Tubuluszellen für die vektorielle Sekretion. OCT2 zeigt eine leichte Präferenz für kleinere monovalente Kationen (Km 10–500 μM) und beruht auf transienten Poreneröffnungen, die durch Substratokklusion ausgelöst werden, was die Substratzugänglichkeit umkehrt. Elektrostatische Wechselwirkungen mit positiv geladenen Aminen ermöglichen die Kationenselektivität, während Anionen ausgeschlossen werden. Diese Aktivität ist entscheidend für die Elimination systemischer Toxine, Neurotransmitter und für die Disposition von Xenobiotika in Leber, Neuronen und Plazenta. Häufige OCT2-Varianten (z.B. R270S, A270S) reduzieren die Transportkapazität für bestimmte Substrate um 20–50%, was das Risiko einer Nephrotoxizität bei Platin-Chemotherapeutika erhöht und die Metforminwirksamkeit bei Diabetes reduziert. |
Nutzungsinformationen
| Anwendung | IHC, FCM | Verdünnung |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Reaktivität | Human | ||||||
| Quelle | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| Lagerpuffer | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Lagerung (Ab dem Datum des Erhalts) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Referenzen
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