SM-164

SM-164 bindet an XIAP, das beide BIR-Domänen enthält, mit einer IC50 von 1,39 nM, wobei es 300- und 7000-mal potenter ist als seine monovalenten Gegenstücke bzw. das natürliche Smac AVPI-Peptid. Diese Verbindung zielt auf zelluläres XIAP ab und induziert effektiv Apoptose bei Konzentrationen von nur 1 nM in der HL-60-Leukämiezelllinie. [1]

Diese Chemikalie induziert Caspase-8- und Caspase-3-abhängige Apoptose in Krebszellen. Sie induziert auch TNFα-abhängige Apoptose und cIAP-1-Degradation. [2]

Es ist in vitro hochsynergistisch mit TRAIL sowohl in TRAIL-sensitiven als auch in TRAIL-resistenten Krebszelllinien von Brust-, Prostata- und Darmkrebs. Diese Verbindung verstärkt die TRAIL-induzierte Apoptose in Krebszellen durch Amplifikation des Caspase-8-vermittelten extrinsischen Apoptose-Signalwegs [3]

SM-164 induziert eine schnelle cIAP-1-Degradation und starke Apoptose in MDA-MB-231-Xenograft-Tumorgeweben und führt zu einer Tumorrückbildung, zeigt aber keine Toxizität in normalen Mausgeweben. [2]

Diese Verbindung induziert cIAP1-Degradation in Tumorgeweben und verstärkt die in vivo-Antitumoraktivität von TRAIL dramatisch, und die Kombination dieser Chemikalie und TRAIL führt zu einer Tumorrückbildung ohne Toxizität für die Tiere. [3]

• Bindungsassays.

  Der FP-basierte Assay für XIAP BIR3-Protein wird beschrieben. Kurz gesagt, 5-Carboxyfluorescein wird an die Lysin-Seitenkette eines mutierten Smac-Peptids mit der Sequenz gekoppelt und dieses fluoreszenzmarkierte Peptid (genannt SM5F) wird als fluoreszierender Tracer in einem FP-basierten Bindungsassay zu XIAP BIR3 verwendet. Der Kd-Wert dieses fluoreszierenden Tracers wird zu 17,9 nM für XIAP BIR3 bestimmt. In kompetitiven Bindungsexperimenten wird eine getestete Verbindung mit 30 nM XIAP BIR3-Protein und 5 nM SM5F in dem Assay-Puffer (100 mM Kaliumphosphat, pH 7,5; 100 μg/ml Rinder-Gammaglobulin; 0,02 % Natriumazid) inkubiert. Der Kd-Wert von SM5F für cIAP-1 BIR3-Protein wird zu 4,1 nM bestimmt. In kompetitiven Bindungsexperimenten werden 10 nM cIAP-1 BIR3-Protein und 2 nM SM5F-Tracer verwendet. Der Kd-Wert von SM5F für cIAP-2 BIR3-Protein wird zu 6,6 nM bestimmt. In kompetitiven Bindungsexperimenten werden 25 nM cIAP-2 BIR3-Protein und 2 nM SM5F-Tracer verwendet. Um die Bindungsaffinitäten von Smac-Mimetika an XIAP, das sowohl BIR2- als auch BIR3-Domänen enthält, zu bestimmen, wird ein FP-basierter kompetitiver Bindungsassay unter Verwendung eines bivalenten fluoreszenzmarkierten Tracers namens Smac-1F etabliert. Der Kd-Wert des bivalent markierten Tracers für XIAP, das BIR2- und BIR3-Domänen enthält, wird zu 2,3 nM bestimmt. In kompetitiven Bindungsexperimenten wird eine getestete Verbindung mit 3 nM XIAP-Protein, das sowohl die BIR2- als auch die BIR3-Domäne (Reste 120-356) enthält, und 1 nM im selben Assay-Puffer inkubiert.

• Zelllinien

  HT-29 cells

• Konzentrationen

  1 μM

• Inkubationszeit

  6 or 12 h

• Methode

  Cells pre-treated with HG (5 μM) for 30 min were treatment with SM-164 (1 μM) for 6 or 12 h.

• Tiermodelle

  MDA-MB-231 xenografted SCID mice

• Dosierungen

  1 and 5 mg/kg

• Verabreichung

  i.v.