SNS-314

In der HCT116-Kolorektalkarzinom-Zelllinie, mit intakten oder depletierten p53-Proteinspiegeln, zeigt SNS-314 Mesylate eine erhöhte Wirksamkeit, wenn es sequenziell mit anderen standardmäßigen Chemotherapeutika verabreicht wird, und die tiefgreifendsten Synergien werden für Wirkstoffe identifiziert, die den Spindel-Assembly-Checkpoint aktivieren. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass diese Verbindung eine potente antiproliferative Aktivität in HCT116-Zellen aufweist und die Koloniebildung in Weichagar hemmt. [3]

Die sequentielle Behandlung mit SNS-314 Mesylate 24 Stunden später führt zu einer signifikanten Hemmung des Tumorwachstums von HCT116-Xenotransplantaten um 72,5 %, während diese Verbindung als Einzelwirkstoff keine signifikante Hemmung des HCT116-Tumorwachstums bewirkt. [2] Im HCT116-Xenotransplantatmodell für menschlichen Darmkrebs führt die Verabreichung von 50 und 100 mg/kg dieser Chemikalie zu einer dosisabhängigen Hemmung der Histon-H3-Phosphorylierung, was auf eine effektive Aurora-B-Hemmung in vivo hinweist. Darüber hinaus zeigen HCT116-Tumoren von mit diesem Wirkstoff behandelten Tieren potente und anhaltende Reaktionen, einschließlich einer Reduktion der phosphorylierten Histon-H3-Spiegel, einer erhöhten Caspase-3 und dem Auftreten einer erhöhten Kerngröße. [3]

• Aurora-A Kinase-Assay

  Humanisierte Maus Aurora A (Aminosäuren 107-403) wird wie zuvor beschrieben in E. coli exprimiert. Für IC50-Assays wird diese Verbindung dreifach in DMSO titriert und 12,5-fach in Assaypuffer (10 mM Tris HCl pH 7,2, 10 mM MgCl₂, 0,05 % NaN₃, 0,01 % Tween-20 und 0,1 % BSA) verdünnt. Diese Chemikalie wird dann 4-fach in Assaypuffer verdünnt, der Aurora A und FAM-PKAtide in Endkonzentrationen von 2 nM bzw. 50 nM enthält. Die Kinase-Reaktion wird durch Zugabe von ATP in Assaypuffer in einer Endkonzentration von 10 mM initiiert und 25 Minuten lang bei 21 °C inkubiert. Als Positivkontrolle wird DMSO anstelle dieser Verbindung hinzugefügt und als Negativkontrolle Assaypuffer anstelle von Aurora A. Beide Kontrollreaktionen werden in dreifacher Ausführung durchgeführt. Zum Nachweis von phosphoryliertem PKAtide wird die Kinase-Reaktion mit Progressive Binding Solution (1:400 Progressive Binding Reagent, 1 × Buffer A, Molecular Devices) in einem Verhältnis von 1:3 kombiniert. Die Mischung wird 30 Minuten lang bei 21 °C inkubiert und die Platte wird auf einem Analyst AD mit Anregung bei 485 nm und Emission bei 530 nm gescannt. Die prozentuale relative enzymatische Aktivität wird berechnet, indem der mP-Wert für jede Vertiefung auf den durchschnittlichen Positivkontrollwert normiert wird. Die Werte der relativen enzymatischen Aktivität werden als Funktion des Logarithmus der Verbindungskonzentration aufgetragen und IC50-Werte werden in der GraphPad Prism-Software unter Verwendung einer sigmoidalen Dosis-Wirkungs-Kurvenanpassung generiert. IC50

• Zelllinien

  HCT116 SCR and HCT116 p53 RNAi cells

• Konzentrationen

  ~125 nM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Viability is measured using the CellTiter-Blue cell viability assay. Cells are treated as described above, although with a 5-day incubation period. Cytotoxicity is determined by measuring intracellular ATP using the CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay. Cells are seeded in white 96-well tissue culture plates at a density of 1.5-2 × 10³ cells/well, and a serial dilution of SNS-314 is dosed in combination with fixed concentrations for a total of 72 hours. Viability is determined as the ratio between the ATP in treated cells versus control cells. Apoptosis is measured using the caspase-Glo 3/7 system. Cells are plated in white 96-well plates as described above and treated first with this compound for 24 hours, washed with 200 μL of 1× PBS, and fresh medium is added with the second agent for 24 hours.

• Tiermodelle

  HCT116 cells are injected s.c. into the right flank of nu/nu mice.

• Dosierungen

  ≤42.5 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p.