SNX-2112

Die Behandlung von BT-474-Zellen mit 1 μM SNX-2112 führt innerhalb von 3 bis 6 Stunden nach Medikamentenexposition zu einer Herunterregulierung der HER2-Expression, wobei die HER2-Expression nach 10 Stunden nahezu vollständig verloren geht. Die Behandlung mit dieser Verbindung führt auch zu einem Rückgang der gesamten Akt-Expression. Sie hemmt die Zellproliferation mit IC50-Werten von 10 bis 50 nM in BT474-, SKBR-3-, SKOV-3-, MDA-468-, MCF-7- und H1650-Krebszellen. Und diese antiproliferativen Effekte sind mit einer Hypophosphorylierung von Rb, einem G1-Arrest und moderaten Apoptose-Werten verbunden. [1] Diese Chemikalie bindet kompetitiv an die N-terminale Adenosintriphosphat-Bindungsstelle von Hsp90. Sie induziert Apoptose über Caspase-8, -9, -3 und Poly(ADP-Ribose)-Polymerase-Spaltung. Die Verbindung hemmt die Zytokin-induzierte Akt- und extrazelluläre Signal-regulierte Kinase (ERK)-Aktivierung und überwindet auch die Wachstumsvorteile, die durch Interleukin-6, Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor-1 und Knochenmark-Stromazellen verliehen werden. Sie hemmt die Röhrchenbildung durch menschliche Nabelvenen-Endothelzellen über die Aufhebung des eNOS/Akt-Signalwegs und hemmt die Osteoklastenbildung deutlich über die Herunterregulierung von ERK/c-fos und PU.1. [2] Untersuchte Zelllinien (acht Zelllinien von Osteosarkom, Neuroblastom, Hepatoblastom und Lymphom) zeigen eine Empfindlichkeit gegenüber diesem Wirkstoff mit IC50-Werten im Bereich von 10-100 nM. Eine höhere Dosis (70 nM) zeigt eine länger anhaltende Hemmung und eine größere Sub-G1-Akkumulation. Die beobachteten Spiegel von Akt1 und C-Raf sind im Laufe der Zeit deutlich reduziert, zusammen mit einem Anstieg der PARP-Spaltung. [3] Eine aktuelle Forschung weist darauf hin, dass diese Verbindung Autophagie zeit- und dosisabhängig über die Akt/mTOR/p70S6K-Hemmung induziert. Sie induziert signifikante Apoptose und Autophagie in menschlichen Melanom-A-375-Zellen und könnte ein wirksames gezieltes Therapeutikum sein. [4]

SNX-2112 ist ein aktiver Metabolit der Verbindungen SNX-5542, die das Wachstum von multiplen Myelom-(MM)-Zellen hemmt und das Überleben in einem Xenograft-Mausmodell verlängert, und die Blockade von Hsp90 durch diese Verbindung hemmt nicht nur das MM-Zellwachstum, sondern wirkt auch im Knochenmark-Mikromilieu, um Angiogenese und Osteoklastogenese zu blockieren. [2]

• ATP Displacement Assay

  Für den Protein-Affinitätsverdrängungs-Assay wird ein purinbasiertes Affinitätsharz durch Inkubation von ATP-gekoppelter Sepharose mit Jurkat-Zelllysat (schockgefroren und in Kochsalzlösung homogenisiert) bei 4 °C erzeugt. Dies wird dann 90 Minuten lang mit SNX-2112 inkubiert. Die durch diese Verbindung eluierten Proteine werden dann mittels SDS-PAGE aufgetrennt, mit Silberfärbung sichtbar gemacht und aus dem Gel für die MS-basierte Identifizierung ausgeschnitten. Kurz gesagt, nach dem Entfärben und der Trypsin-Verdauung werden Peptide mit μC18 ZipTips extrahiert und dann eluiert und direkt auf ein herkömmliches Edelstahl-Matrix-unterstütztes Laserdesorptions/Ionisations-Target mit einer gesättigten Lösung von α-Cyano-4-hydroxyzimtsäure in 50% Acetonitril, 0,15% Ameisensäure aufgetragen. Massenspektren werden dann mit einem MALDI-TOF/TOF 4700 Proteomics Analyzer erfasst. MS-Spektren werden erfasst (1.000 Schüsse pro Spektrum), und die drei Peaks aus jedem mit dem größten Signal-Rausch-Verhältnis werden automatisch zur Tandem-MS-Analyse (3000 Schüsse pro Spektrum) eingereicht. Die Kollisionsenergie beträgt 1 keV. Luft wird als Kollisionsgas verwendet. Die Proteinidentifizierung erfolgt aus den MS- und Tandem-MS-Daten unter Verwendung der GPS Explorer Software mit der integrierten Mascot-Datenbank-Suchmaschine.

• Zelllinien

  BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 and H1650 cancer cells

• Konzentrationen

  0-500 nM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  Cell viability is determined by seeding 2-5 × 10³ cells per well in 96- well plates and treating with SNX-2112 24 hours after plating in complete medium (200 μL). Each drug concentration is tested in eight wells. Cells are assayed using the Alamar blue viability test after a 96-h incubation. Flow cytometry is done using nuclei stained with ethidium bromide and isolated via the Nusse protocol

• Tiermodelle

  5 × 10⁶ MM.1S cells are inoculated subcutaneously in the Fox Chase SCID mice (6-7 weeks old).

• Dosierungen

  20 or 40 mg/kg

• Verabreichung

  SNX-5422 is administered orally 3 times per week, total 3 weeks.