Stattic

Stattic hemmt die Bindung eines Phosphotyrosin-haltigen Peptids, das vom gp130-Rezeptor stammt, an die STAT3 SH2-Domäne auf eine stark temperaturabhängige Weise. Diese Verbindung hat nur eine sehr schwache Wirkung auf die Bindung eines Tyrosin-phosphorylierten Peptids an die SH2-Domäne der Tyrosinkinase Lck. Und sie hemmt nicht die Dimerisierung von zwei anderen dimeren Transkriptionsfaktoren (c-Myc/Max und Jun/Jun). Sie hemmt auch fluoresceinmarkierte Phosphopeptide an die SH2-Domänen von STAT1 und STAT5b. Diese Chemikalie hemmt selektiv die DNA-Bindung von STAT3-Homodimeren bei einer Konzentration von 10 μM. Es wurde gezeigt, dass sie die zelluläre Phosphorylierung von STAT3 an Tyr705 hemmt, mit geringem Einfluss auf die STAT1-Phosphorylierung an Tyr701 (in HepG2-Zellen) oder die Phosphorylierung von JAK1, JAK2 und c-Src (in MDA-MB-231- und MDA-MB-235S-Zellen). Diese Verbindung erhöht die Apoptose-Rate von STAT3-abhängigen Brustkrebszelllinien. [1]

• Hochdurchsatz-Screening und Fluoreszenzpolarisationstests

  Das Screening wird bei etwa 30 °C durchgeführt. Die Spezifität der Screening-Treffer wird in analogen Assays zur Bindung der Testverbindungen an die SH2-Domänen von STAT1, STAT5 und Lck validiert. Die Endkonzentration der Pufferkomponenten, die für alle FP-Assays verwendet werden, beträgt 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM EDTA, 0,1 % Nonidet P-40, 50 mM NaCl und 10 % DMSO. Die Abwesenheit von Dithiothreitol ist für die inhibitorische Aktivität essentiell. Die Sequenzen der Peptide sind: STAT3, 5-Carboxyfluorescein-GY(PO₃H₂)LPQTV-NH₂; STAT1, 5-Carboxyfluorescein-GY(PO₃H₂)DKPHVL; STAT5, 5-Carboxyfluorescein-GY(PO₃H₂)LVLDKW; und Lck, 5-Carboxyfluorescein-GY(PO₃H₂)EEIP. Für die Spezifitätsanalyse bei 30 °C werden Proteine in einer Konzentration von 150 nM (STAT1, STAT3 und STAT5) verwendet. Für die Spezifitätsanalyse bei 37 °C werden Proteine in einer Konzentration von 370 nM (STAT3) oder 100 nM (Lck) verwendet. Proteine werden mit Testverbindungen in Eppendorf-Röhrchen bei den angegebenen Temperaturen für 60 Minuten inkubiert, bevor die entsprechenden 5-Carboxyfluorescein-markierten Peptide (Endkonzentration: 10 nM) hinzugefügt werden. Vor der Messung bei Raumtemperatur lässt man die Mischungen mindestens 30 Minuten lang äquilibrieren. Testverbindungen werden in den angegebenen Konzentrationen verwendet, verdünnt aus einem 20-fachen Stammlösung in DMSO. Bindungskurven und Hemmkurven werden mit SigmaPlot angepasst. Alle Kompetitionskurven werden dreimal in unabhängigen Experimenten wiederholt.

• Zelllinien

  Ly3 cells

• Konzentrationen

  ~2.5 μM

• Inkubationszeit

  48 h

• Methode

  MTS

• Tiermodelle

  Ly3 parental NOD/SCID IL2R null xenograft

• Dosierungen

  3.75 mg/kg every day

• Verabreichung

  intra tumor