T0070907

T0070907 ist ein potenter und selektiver PPARγ-Antagonist. Mit einer scheinbaren Bindungsaffinität von 1 nM modifiziert diese Verbindung kovalent PPARγ an Cystein 313 in Helix 3 des menschlichen PPARγ2. Es blockiert die PPARγ-Funktion sowohl in zellbasierten Reportergen- als auch in Adipozyten-Differenzierungsassays. Im Einklang mit seiner Rolle als Antagonist von PPARγ blockiert diese Chemikalie die Agonist-induzierte Rekrutierung von Coaktivator-abgeleiteten Peptiden zu PPARγ in einem homogenen zeitaufgelösten Fluoreszenz-basierten Assay und fördert die Rekrutierung des transkriptionellen Corepressors NCoR zu PPARγ sowohl in Glutathion-S-Transferase-Pull-down-Assays als auch in einem PPARγ/Retinoid-X-Rezeptor (RXR) α-abhängigen Gel-Shift-Assay. Studien mit mutierten Rezeptoren deuten darauf hin, dass es die Interaktion von PPARγ mit diesen Kofaktorproteinen moduliert, indem es die Konformation von Helix 12 der Ligandenbindungsdomäne von PPARγ beeinflusst. Interessanterweise, während die T0070907-induzierte NCoR-Rekrutierung zum PPARγ/RXRα-Heterodimer durch die gleichzeitige Behandlung mit dem RXRα-Agonisten LGD1069 fast vollständig umgekehrt werden kann, hat diese Verbindung nur geringe Auswirkungen auf die LGD1069-induzierte Coaktivator-Rekrutierung zum PPARγ/RXRα-Heterodimer. [1] Diese chemische Behandlung hemmt Proliferation, Invasion und Migration, beeinflusst aber die Apoptose nicht signifikant. Die molekulare Hemmung unter Verwendung eines dominant-negativen (Δ462)-Rezeptors führt zu ähnlichen Ergebnissen. Sie vermittelt auch eine dosisabhängige Abnahme der Phosphorylierung von PPARγ und seiner Fähigkeit, an DNA zu binden, und kann die Mitogen-aktivierte Proteinkinase-Signalgebung direkt beeinflussen. [2]

Lipopolysaccharid-Vorkonditionierung schwächt die Entwicklung von Nierenfunktionsstörungen, hepatozellulären Schäden und Kreislaufversagen sowie den Anstieg der Plasmawerte von Interleukin-1 [beta], verursacht durch schwere Endotoxämie, signifikant ab. Diese Verbindung kann all diese positiven Effekte, die durch die Vorkonditionierung mit Lipopolysaccharid erzielt werden, abschwächen [3]

• Ligandenbindungsassay

  Um die Bindungsaffinität von T0070907 zu den PPARs zu bestimmen, wird ein Szintillationsnäherungsassay (SPA) mit den folgenden Modifikationen durchgeführt. Eine 90-μl-Reaktion enthält SPA-Puffer (10 mM KH₂PO₄, 10 mM KH₂PO₄, 2 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM Dithiothreitol, 2 mM CHAPS, 10 % (v/v) Glycerin, pH 7,1), 50 ng GST-PPARγ (oder 150 ng GST-PPARα, GST-PPARδ), 5 nM ³H-markierte Radioliganden und 5 μl dieser Verbindung in Me₂SO. Nach Inkubation für 1 h bei Raumtemperatur werden 10 μl polylysinbeschichtete SPA-Beads (bei 20 mg/ml in SPA-Puffer) hinzugefügt, und die Mischung wird 1 h lang inkubiert, bevor sie in Packard Topcount abgelesen wird.

• Zelllinien

  MCF-7 cells

• Konzentrationen

  20 μM and higher concentrations

• Inkubationszeit

  48 h

• Methode

  MTS assay

• Tiermodelle

  Preconditioning is performed by administering a low dose (1 mg/kg) of Escherichia coli LPS (serotype 0.127:B8) intraperitoneally 24 hr before the induction of severe endotoxemia.

• Dosierungen

  1 mg/kg

• Verabreichung

  intraperitoneally