Tanespimycin (17-AAG)

Tanespimycin (17-AAG), ein Analog von Geldanamycin, zeigt eine mehr als 100-fach höhere Bindungsaffinität für Hsp90, das aus HER-2-überexprimierenden Krebszellen (BT474, N87, SKOV3 und SKBR3) oder BT474-Mammakarzinomzellen gewonnen wurde, mit IC50-Werten von 5-6 nM. [1] Diese Verbindung verursacht den Abbau von HER2, HER3, Akt und sowohl mutiertem als auch Wildtyp-Androgenrezeptor (AR), was zu einem RB-abhängigen G1-Wachstumsstopp von Prostatakrebszellen wie LNCaP, LAPC-4, DU-145 und PC-3 mit IC50-Werten von 25-45 nM führt. [2] Neben der Induktion der Apoptose von Ba/F3-Zellen, die mit Wildtyp-BCR-ABL transformiert sind, mit einer IC50 von 5,2 μM, hat es die Fähigkeit, die Apoptose von Zellen zu induzieren, die mit T315I- und E255K-BCR-ABL-Mutanten transformiert sind, mit IC50-Werten von 2,3 μM bzw. 1,0 μM, indem es den Abbau sowohl des Wildtyp-BCR-ABL-Proteins als auch der Mutanten induziert. [3]

Tanespimycin (17-AAG) zeigt eine signifikant höhere Bindungsaffinität für Hsp90 aus 3T3-src-, B16- oder CT26-Xenotransplantaten in Nacktmäusen mit IC50-Werten von 8-35 nM im Vergleich zu der aus Normalgeweben mit IC50-Werten von 200-600 nM. [1] Die Verabreichung dieser Verbindung (~50 mg/kg) führt zu einem signifikanten Rückgang der AR-, HER2-, HER3- und Akt-Expression in dosisabhängiger Weise mit einem Rückgang von >50% bei einer Dosis von 50 mg/kg, was zu einer dosisabhängigen Hemmung des Wachstums von androgenabhängigen (CWR22) und -unabhängigen (CWR22R und CWRSA6) Prostatakrebs-Xenotransplantaten um 67%, 80% bzw. 68% bei einer Dosis von 50 mg/kg führt. [2]

• Hsp90-Bindungstests

  Gereinigtes natives Hsp90-Protein oder Zelllysate aus HER-2-überexprimierenden Krebszellen (BT474, N87, SKOV3 und SKBR3) oder BT474-Mammakarzinomzellen in Lysepuffer (20 mM HEPES, pH 7,3, 1 mM EDTA, 5 mM MgCl₂, 100 mM KCl) werden 30 Minuten lang bei 4 °C mit verschiedenen Konzentrationen von Tanespimycin (17-AAG) inkubiert und anschließend 1 Stunde lang bei 4 °C mit Biotin-GM, das an BioMag-Streptavidin-Magnetkügelchen gebunden ist, inkubiert. Die Röhrchen werden auf ein Magnetgestell gestellt und der ungebundene Überstand entfernt. Die Magnetkügelchen werden dreimal in Lysepuffer gewaschen und 5 Minuten lang bei 95 °C in SDS-PAGE-Probenpuffer erhitzt. Die Proben werden auf SDS-Proteingelen analysiert und Western Blots mit den angegebenen Antikörpern durchgeführt. Die Banden in den Western Blots werden mit dem Bio-rad Fluor-S MultiImager quantifiziert und die prozentuale Hemmung der Bindung von Hsp90 an das Biotin-GM berechnet. Die angegebene IC50 ist die Konzentration dieser Verbindung, die benötigt wird, um eine halbmaximale Hemmung der Bindung zu verursachen.

• Zelllinien

  BT474, SKBR3, N87, SKOV3, MCF7, MDA468, Hs578T, Hs578Bst, A549, HT29, U87, SKMG3, HT1080, RPTEC, NDF, HMVEC, HMEC, HUVEC, and PBMC cells

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Inkubationszeit

  5 days

• Methode

  Cells are seeded in 96-well plates at 2,000 cells per well in a final culture volume of 100 μL for 24 hours before the addition of increasing concentrations of Tanespimycin (17-AAG), which is incubated for 5 days. Viable cell number is determined using the Celltiter 96 AQueous Nonradioactive Cell Proliferation Assay. The value of the background absorbance at 490 nm (A₄₉₀) of wells not containing cells is subtracted. Percentage of viable cells = (A₄₉₀ of this compound treated sample/A₄₉₀ untreated cells) × 100. The IC50 is defined as the concentration that gave rise to 50% viable cell number.

• Tiermodelle

  Male nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-dependent CWR22 xenograft, and female nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-independent xenografts CWR22R and CWRSA6

• Dosierungen

  ~50 mg/kg

• Verabreichung

  Injection i.p.