CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

Katalog-Nr.S5001 Charge:S500113

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Technische Daten

Formel

C16H20N6O.C6H8O7
Molekulargewicht 504.49 CAS-Nr. 540737-29-9
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung CP-690550 (Tofacitinib) Citrate (CP-690550, Tasocitinib) ist ein neuartiger JAK Inhibitor mit einer IC50 von 1 nM, 20 nM und 112 nM gegen JAK3, JAK2 bzw. JAK1. Es hat auch Anti-infection Aktivität.
Ziele
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
In vitro CP-690550 (Tofacitinib) Citrate hemmt die IL-2-vermittelte Proliferation menschlicher T-Zellen und die IL-15-induzierte CD69-Expression mit einer IC50 von 11 nM bzw. 48 nM. CP-690550 (Tofacitinib) Citrate verhindert gemischte Lymphozytenreaktionen mit einer IC50 von 87 nM. Die Behandlung von murinen Faktor-abhängigen Zell Patersen-Erythropoietin-Rezeptor (FDCP-EpoR)-Zellen, die menschliches Wildtyp- oder V617F-JAK2 beherbergen, mit CP-690550 (Tofacitinib) Citrate führt zur Verhinderung der Zellproliferation mit einer IC50 von 2,1 µM bzw. 0,25 µM. CP-690550 (Tofacitinib) Citrate hemmt die Interleukin-6-induzierte Phosphorylierung von STAT1 und STAT3 mit einer IC50 von 23 nM bzw. 77 nM. Darüber hinaus erzeugt CP-690550 (Tofacitinib) Citrate einen signifikanten pro-apoptotischen Effekt auf murine FDCP-EpoR-Zellen, die JAK2VV617F tragen, während ein geringerer Effekt für Zellen beobachtet wird, die Wildtyp-JAK2 tragen. Diese Aktivität ist gekoppelt mit der Hemmung der Phosphorylierung der wichtigen JAK2V617F-abhängigen nachgeschalteten Signaltransduktor- und Aktivator-der-Transkription (STAT)3, STAT5 und v-akt murines Thymom-virales Onkogen-Homolog (AKT). Zusätzlich verhindert CP-690550 (Tofacitinib) Citrate die IL-15-induzierte CD69-Expression in menschlichen und Javaneraffen-NK- und CD8+-T-Zellen in vitro.
In vivo CP-690550 (Tofacitinib) Citrate verringert eine verzögerte Überempfindlichkeitsreaktion und verlängert die Überlebensdauer von Herztransplantaten in murinen Modellen. Darüber hinaus führt die Behandlung ex-vivo-expandierter erythropoider Vorläufer von JAK2V617F-positiven PV-Patienten mit CP-690550 (Tofacitinib) Citrate zu einer spezifischen, antiproliferativen (IC50 = 0,2 μM) und pro-apoptotischen Aktivität. Im Gegensatz dazu sind expandierte Vorläufer von gesunden Kontrollen in Proliferations- (IC50 > 1,0 μM) und Apoptose-Assays weniger empfindlich gegenüber CP-690550 (Tofacitinib) Citrate. Während 2 Wochen der CP-690550 (Tofacitinib) Citrate-Dosierung mit 10 und 30 mg/kg/Tag wird ein signifikanter, zeitabhängiger Rückgang der NK-Zellzahlen im Vergleich zur Vehikelbehandlung beobachtet. Die Zahlen der Effektorzellen des Gedächtnisses CD8+ in der mit CP-690550 (Tofacitinib) Citrate behandelten Gruppe sind 55 % geringer als die in mit Vehikel behandelten Tieren beobachteten.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Enzymtests

    Die JAK1, JAK2 und JAK3 Kinase-Assays verwenden ein Protein, das in Baculovirus-infizierten SF9-Zellen exprimiert wird (ein Fusionsprotein von GST und der katalytischen Domäne des menschlichen JAK Enzyms), gereinigt durch Affinitätschromatographie an Glutathion-Sepharose. Das Substrat für die Reaktion ist Polyglutaminsäure-Tyrosin [PGT (4:1)], das über Nacht bei 37 °C mit 100 μg/mL auf Nunc Maxi Sorp-Platten beschichtet wird. Die Platten werden dreimal gewaschen, und JAK Enzym wird zu den Wells gegeben, die 100 μL Kinasepuffer (50 mM HEPES, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM Natriumorthovanadat enthielten. Für CP-690550 (Tofacitinib) Citrate wird es auch für den Kinase-Assay in verschiedenen Dosen zugegeben. Nach Inkubation bei Raumtemperatur für 30 min werden die Platten dreimal gewaschen. Der Grad des phosphorylierten Tyrosins in einem gegebenen Well wird durch einen Standard-ELISA-Assay unter Verwendung eines Anti-Phosphotyrosin-Antikörpers bestimmt.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • Konzentrationen

    0-4 μM

  • Inkubationszeit

    72 hours

  • Methode

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
Tierstudie:

[2]
  • Tiermodelle

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • Dosierungen

    10, 30 mg/kg/d

  • Verabreichung

    Oral gavage

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

Kundenproduktvalidierung

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Daten von [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

Sellecks CP-690550 (Tofacitinib) Citrate Wurde zitiert von 198 Publikationen

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

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