Torin 1

Katalog-Nr.S2827 Charge:S282701

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Technische Daten

Formel

C35H28F3N5O2
Molekulargewicht 607.62 CAS-Nr. 1222998-36-8
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 2 mg/mL (3.29 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Torin 1 ist ein potenter Inhibitor von mTORC1/2 mit einer IC50 von 2 nM/10 nM in zellfreien Assays; zeigt eine 1000-fache Selektivität für mTOR im Vergleich zu PI3K.
Ziele
mTORC1
(Cell-free assay)		 mTOR
(Cell-free assay)		 DNA-PK
(Cell-free assay)		 mTORC2
(Cell-free assay)		 p110γ
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
2 nM 4.32 nM 6.34 nM 10 nM 171 nM
In vitro Torin1 hemmt die Phosphorylierung von mTORC1- und mTORC2-Substraten in Zellen bei Konzentrationen von 2 bzw. 10 nM. Darüber hinaus zeigt Torin1 eine 1000-fache Selektivität für mTOR gegenüber PI3K (EC50 = 1800 nM) und eine 100-fache Bindungsselektivität gegenüber 450 anderen Proteinkinasen. Torin1 verursacht einen Zellzyklusarrest über einen rapamycinresistenten Mechanismus, der auch unabhängig von mTORC2 ist. Torin1 stört mTORC1-abhängige Phänotypen vollständiger als Rapamycin. Rapamycinresistente Funktionen von mTORC1 sind für die Cap-abhängige Translation erforderlich. In einer kürzlich durchgeführten Studie wird berichtet, dass Torin1 die Neurotensinsekretion und Genexpression durch Aktivierung des MEK/ERK/c-Jun-Signalwegs in der menschlichen endokrinen Zelllinie BON erhöht.
In vivo Torin1 ist in einer Dosis von 20 mg/kg in einem U87MG-Xenograft-Modell wirksam und zeigt eine gute pharmakodynamische Hemmung der nachgeschalteten Effektoren von mTOR in Tumor- und peripheren Geweben.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • mTORC1- und mTORC2-in-vitro-Kinase-Assays

    Zur Herstellung von löslichem mTORC1 werden HEK-293T-Zelllinien, die N-terminal FLAG-markiertes Raptor stabil exprimieren, unter Verwendung von vesikulärem Stomatitis-Virus G-pseudotypisiertem MSCV-Retrovirus generiert. Für mTORC2 werden ähnliche HeLa-Zellen, die N-terminal FLAG-markiertes Protor-1 stabil exprimieren, generiert. Beide Komplexe werden durch Lysieren von Zellen in 50 mm HEPES, pH 7,4, 10 mm Natriumpyrophosphat, 10 mm Natrium-β-glycerophosphat, 100 mm NaCl, 2 mm EDTA, 0,3 % CHAPS gereinigt. Die Zellen werden 30 min bei 4 °C lysiert, und die unlösliche Fraktion wird durch Mikrozentrifugation bei 13.000 U/min für 10 min entfernt. Die Überstände werden 1 h lang mit FLAG-M2-monoklonalem Antikörper-Agarose inkubiert und dann dreimal mit Lyse-Puffer und einmal mit Lyse-Puffer, der eine Endkonzentration von 0,5 M NaCl enthält, gewaschen. Gereinigtes mTORC1 wird mit 100 μg/mL 3×FLAG-Peptid in 50 mm HEPES, pH 7,4, 100 mm NaCl eluiert. Das Eluat kann aliquotiert und bei -80 °C gelagert werden. Die Substrate S6K1 und Akt1 werden gereinigt. Kinase-Assays werden 20 min bei 30 °C in einem Endvolumen von 20 μL durchgeführt, bestehend aus Kinase-Puffer (25 mm HEPES, pH 7,4, 50 mm KCl, 10 mm MgCl2, 500 μm ATP) und 150 ng inaktivem S6K1 oder Akt1 als Substrate. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 80 μL Probenpuffer gestoppt und 5 min gekocht. Die Proben werden anschließend mittels SDS-PAGE und Immunoblotting analysiert.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    MEFs

  • Konzentrationen

    ~250 nM

  • Inkubationszeit

    4 days

  • Methode

    Cell viability is assessed with the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay. On Day 0, 96-well plates are seeded with 500 cells per well and grown overnight. On Day 1, cells are treated with the appropriate compounds and subsequently analyzed on Days 3-5. For analysis, plates are incubated for 60 min at room temperature; 50 μL of CellTiter-Glo reagent is added to each well, and plates are mixed on an orbital shaker for 12 min. Luminescence is quantified on a standard plate luminometer.

Tierstudie:[2]
  • Tiermodelle

    U87MG xenograft model

  • Dosierungen

    20 mg/kg

  • Verabreichung

    Administered via i.p. once daily

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19150980/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20860370/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21508335/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20508131/

Kundenproduktvalidierung

Huh-7.5 cells were treated with increasing concentration of Torin 1, a known autophagy inducer, and the autophagy response was assessed by measuring LC3II and p62 levels.

Daten von [ Am J Pathol , 2014 , 184(1), 214-29 ]

Flag-tagged SENP3 was immunoprecipitated from HeLa cells and used for in vitro phosphorylation assay with [32P]ATP with either the mock-treated or Torin1-treated mTOR/Raptor/MLST8 complex. (Upper) The samples then were subjected to SDS-PAGE, followed by autoradiography. mTOR autophosphorylation is indicated by an asterisk. (Lower) Immunopurified SENP3 was monitored by Western blotting with anti-Flag antibody.

Daten von [ Mol Cell Biol , 2014 , 34(24), 4474-84 ]

Representative Western blots showing LC3 in PP242 (PP) or Torin1 (Tor) treated HepG2 cells. HepG2 cells were treated with 10 uM PP242 or 0.1 uM Torin1 for 24 h.

Daten von [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 10.1016/j.bbrc.2014.05.047 ]

Bone marrow derived macrophages were pre-treated with 10nM Torin 1 for 1h prior to LPS treatment (100 ng/ml). TNF-a production was analyzed 24h later.

, , Lim Hsiu Kim, Lina from National University of Singapore

Sellecks Torin 1 Wurde zitiert von 259 Publikationen

GPNMB disrupts SNARE complex assembly to maintain bacterial proliferation within macrophages [ Cell Mol Immunol, 2025, NONE] PubMed: 40038549
DMXL1 promotes recruitment of V1-ATPase to lysosomes upon TRPML1 activation [ Nat Struct Mol Biol, 2025, 10.1038/s41594-025-01581-x] PubMed: 40527988
RNA G-quadruplexes control mitochondria-localized mRNA translation and energy metabolism [ Nat Commun, 2025, 16(1):3292] PubMed: 40195294
S100P is a ferroptosis suppressor to facilitate hepatocellular carcinoma development by rewiring lipid metabolism [ Nat Commun, 2025, 16(1):509] PubMed: 39779666
USP5 stabilizes YTHDF1 to control cancer immune surveillance through mTORC1-mediated phosphorylation [ Nat Commun, 2025, 16(1):1313] PubMed: 39900921
Dual mechanism of autophagy gene repression by PHF23 and therapeutic potential of its inhibition in protein aggregation disorders [ Nucleic Acids Res, 2025, 53(22)gkaf1317] PubMed: 41359382
Excessive autophagic degradation of MYLK3 causes sunitinib-induced cardiotoxicity [ Autophagy, 2025, 1-20.] PubMed: 40568844
ESCRT III-mediated lysosomal repair improve renal tubular cell injury in cisplatin-induced AKI [ Autophagy, 2025, 1-18.] PubMed: 40152606
TBK1 is a signaling hub in coordinating stress-adaptive mechanisms in head and neck cancer progression [ Autophagy, 2025, 1-23.] PubMed: 40114316
S-palmitoylation modulates ATG2-dependent non-vesicular lipid transport during starvation-induced autophagy [ EMBO J, 2025, 44(9):2596-2619] PubMed: 40128367

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