Trametinib DMSO solvate (GSK1120212B)

GSK1120212 hemmt die Phosphorylierung von MBP, unabhängig vom Isotyp von Raf und MEK, mit IC50-Werten im Bereich von 0,92 nM bis 3,4 nM. GSK1120212 zeigt keine Hemmung der Kinaseaktivitäten von c-Raf, B-Raf, ERK1 und ERK2. Darüber hinaus zeigt GSK1120212 keine drastische hemmende Aktivität gegen die anderen 98 Kinasen. GSK1120212 zeigt eine potente hemmende Aktivität gegen humane kolorektale Krebszelllinien. HT-29- und COLO205-Zellen, die bekanntermaßen einen konstitutiv aktiven B-Raf-Mutanten aufweisen, sind mit IC50-Werten von 0,48 nM bzw. 0,52 nM am empfindlichsten gegenüber GSK1120212. Die Zelllinien, die eine K-Ras-Mutation aufweisen, zeigen eine breite Empfindlichkeit gegenüber GSK1120212 mit IC50-Werten von 2,2-174 nM. Im Gegensatz dazu erweisen sich COLO320 DM-Zellen, die das Wildtyp-Gen sowohl in B-Raf als auch in K-Ras tragen, als resistent gegenüber GSK1120212 selbst bei 10 μM. Eine 24-stündige Behandlung mit GSK1120212 induziert in allen empfindlichen Zelllinien einen Zellzyklusarrest in der G1-Phase. Konsistenterweise führt die Behandlung mit GSK1120212 zu einer Hochregulierung von p15INK4b und/oder p27KIP1 in den meisten kolorektalen Krebszelllinien. GSK1120212 hemmt die konstitutive ERK-Phosphorylierung in allen empfindlichen Zelllinien. GSK1120212 induziert Apoptosis sowohl in HT-29- als auch in COLO205-Zellen, wobei COLO205-Zellen jedoch empfindlicher auf GSK1120212 reagieren als HT-29-Zellen hinsichtlich der Apoptosis-Induktion.[1] GSK1120212 blockiert die Produktion von Tumornekrosefaktor-α und Interleukin-6 aus peripheren Blutmononukleären Zellen (PBMCs).[2]

Die orale Verabreichung von GSK1120212 in Dosen von 0,3 mg/kg oder 1 mg/kg einmal täglich über 14 Tage ist wirksam bei der Hemmung des HT-29-Xenograft-Wachstums, und 1 mg/kg GSK1120212 blockiert den Tumoranstieg nahezu vollständig. Die Phosphorylierung von ERK1/2 wird in den etablierten Tumorgeweben durch eine einzelne orale Dosis von 1 mg/kg GSK1120212 vollständig gehemmt, und sowohl die p15INK4b- als auch die p27KIP1-Proteinspiegel werden nach 14-tägiger Behandlung mit GSK1120212 hochreguliert. Im COLO205-Xenograft-Modell wird bereits bei einer Dosis von 0,3 mg/kg eine Tumorrückbildung beobachtet. Bei einer Dosis von 1 mg/kg wird eine vollständige Regression bei 4 von 6 Mäusen erreicht, bei denen der Tumor so weit degeneriert, dass das Tumorvolumen nicht mehr messbar ist.[1] Die Verabreichung von GSK1120212 in einer Dosis von 0,1 mg/kg unterdrückt die Adjuvans-induzierte Arthritis (AIA) und die Typ-II-Kollagen-induzierte Arthritis (CIA) bei Lewis-Ratten bzw. DBA1/J-Mäusen nahezu vollständig.[2]

• Raf-MEK-ERK Kaskadenkinasetest

  Nicht-phosphoryliertes Myelin-Basisches Protein (MBP) wird auf eine ELISA-Platte beschichtet, und die aktive Form von B-Raf/c-Raf wird mit unphosphoryliertem MEK1/MEK2 und ERERK2 in 10 μM ATP und 12,5 mM MgCl2 enthaltendem MOPS-Puffer in Gegenwart verschiedener Konzentrationen von GSK1120212 gemischt. Die Phosphorylierung von MBP wird mit dem Anti-phospho-MBP-Antikörper nachgewiesen.

• Zelllinien

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320 cells

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  3 or 4 days

• Methode

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to GSK1120212. Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Tiermodelle

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosierungen

  ~1 mg/kg/day

• Verabreichung

  o.g.