Datenblatt

Biologische Beschreibung

Spezifität	TSH Receptor/TSH-R Antibody [L10M22] weist endogene Spiegel des gesamten TSH Receptor/TSH-R Proteins nach.
Hintergrund	Der Thyreoidea-stimulierende Hormonrezeptor (TSHR) ist ein wichtiger Regulator des Schilddrüsenhormonstoffwechsels und dient als primärer Kontrolleur der Schilddrüsenzellfunktion und des Wachstums. Er gehört zur Familie der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren mit sieben Transmembrandomänen und ist an der basolateralen Membran von Schilddrüsenfollikelzellen positioniert. Das TSHR-Protein besteht aus 764 Aminosäuren, hat ein Molekulargewicht von ca. 87 kDa und vermittelt seine Wirkungen durch die Interaktion mit mehreren G-Protein-Subtypen – insbesondere Gαs und Gαq. Bei Aktivierung durch TSH initiiert der Rezeptor die intrazelluläre Signalübertragung über diese G-Proteine, wodurch die Aktivität nachgeschalteter Effektormoleküle moduliert wird. Der Gαs-Signalweg stimuliert die zyklische Adenosinmonophosphat (cAMP)-Kaskade, während der Gαq-Signalweg die Phospholipase C (PLC)-Kaskade aktiviert. Bei erhöhten TSH-Konzentrationen bindet cAMP an die Proteinkinase A (PKA), die verschiedene Zieleffektoren phosphoryliert und deren katalytische Aktivität erhöht. Parallel dazu erzeugt die PLC-Aktivierung Inositol-1,4,5-triphosphat (IP₃) und Diacylglycerin (DAG), wodurch die zellulären Reaktionen weiter verstärkt werden. Die TSHR-Expression wird durch physiologische TSH-Spiegel positiv reguliert, aber bei anhaltend hohen TSH-Konzentrationen herunterreguliert. Eine chronische Überstimulation von TSHR, insbesondere über den cAMP-Signalweg, kann zu einer übermäßigen Schilddrüsenhormonsekretion, Schilddrüsenfollikelhyperplasie und klinischer Hyperthyreose führen. Mutationen im TSHR-Gen können die Proteinstruktur des Rezeptors oder seine posttranslationale Modifikationen beeinflussen und dadurch die Rezeptorfunktion verändern. Obwohl TSHR nicht direkt die Karzinogenese einleitet, kann es erheblich zum Tumorwachstum beitragen, wenn Onkogene bereits aktiviert sind.

Spezifität

TSH Receptor/TSH-R Antibody [L10M22] weist endogene Spiegel des gesamten TSH Receptor/TSH-R Proteins nach.

Hintergrund

Der Thyreoidea-stimulierende Hormonrezeptor (TSHR) ist ein wichtiger Regulator des Schilddrüsenhormonstoffwechsels und dient als primärer Kontrolleur der Schilddrüsenzellfunktion und des Wachstums. Er gehört zur Familie der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren mit sieben Transmembrandomänen und ist an der basolateralen Membran von Schilddrüsenfollikelzellen positioniert. Das TSHR-Protein besteht aus 764 Aminosäuren, hat ein Molekulargewicht von ca. 87 kDa und vermittelt seine Wirkungen durch die Interaktion mit mehreren G-Protein-Subtypen – insbesondere Gαs und Gαq. Bei Aktivierung durch TSH initiiert der Rezeptor die intrazelluläre Signalübertragung über diese G-Proteine, wodurch die Aktivität nachgeschalteter Effektormoleküle moduliert wird. Der Gαs-Signalweg stimuliert die zyklische Adenosinmonophosphat (cAMP)-Kaskade, während der Gαq-Signalweg die Phospholipase C (PLC)-Kaskade aktiviert. Bei erhöhten TSH-Konzentrationen bindet cAMP an die Proteinkinase A (PKA), die verschiedene Zieleffektoren phosphoryliert und deren katalytische Aktivität erhöht. Parallel dazu erzeugt die PLC-Aktivierung Inositol-1,4,5-triphosphat (IP₃) und Diacylglycerin (DAG), wodurch die zellulären Reaktionen weiter verstärkt werden. Die TSHR-Expression wird durch physiologische TSH-Spiegel positiv reguliert, aber bei anhaltend hohen TSH-Konzentrationen herunterreguliert. Eine chronische Überstimulation von TSHR, insbesondere über den cAMP-Signalweg, kann zu einer übermäßigen Schilddrüsenhormonsekretion, Schilddrüsenfollikelhyperplasie und klinischer Hyperthyreose führen. Mutationen im TSHR-Gen können die Proteinstruktur des Rezeptors oder seine posttranslationale Modifikationen beeinflussen und dadurch die Rezeptorfunktion verändern. Obwohl TSHR nicht direkt die Karzinogenese einleitet, kann es erheblich zum Tumorwachstum beitragen, wenn Onkogene bereits aktiviert sind.

Nutzungsinformationen

Anwendung

IHC

Verdünnung

IHC

1:1000

Reaktivität

Human

Quelle

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

Lagerpuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Lagerung
(Ab dem Datum des Erhalts)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentelle Methoden
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Experimentelle Methoden

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28117293/

Anwendungsdaten

IHC

Validiert von Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human thyroid gland tissue with F3696 at 1:1000 dilution.