Lersivirine (UK-453061)

Lersivirine (UK-453061) bindet an HIV-1 wt Reverse Transcriptase (RT) mit einem K_d von 624 nM. Es ist ein sehr schwacher Inhibitor der humanen DNA-Polymerase beta, mit einem extrapolierten geometrischen Mittel-IC50 von ungefähr 20 mM, was zu einem vorhergesagten Selektivitätsindex von 166.000 führt. Diese Verbindung ist in der Lage, die HIV-1-Virusreplikation in MT-2-Zellen, die mit wt NL4-3 infiziert sind, mit einer EC50 von 5 nM bis 35 nM gegen einen MOI von 0,005 bis 0,5 zu hemmen. Es behält die Aktivität gegen 80% der Viren mit Genotypen, die K103N als einzelne NNRTI-Mutation enthalten (gegenüber 7% für Efavirenz), 57% der Viren mit Genotypen, die Y181C als einzelne NNRTI-Mutation enthalten (43% für Efavirenz), und 46% der Viren mit Genotypen, die G190A als einzelne NNRTI-Mutation enthalten (0% für Efavirenz). Lersivirine hemmt die Replikation des Stammes Ba-L in PBL mit einem geometrischen Mittel-EC50 von 3,38 nM (95% CI, 2,26 bis 5,05 nM) und einem EC90 von 9,87 nM (95% CI, 6,63 bis 14,7 nM), wobei bis zu 50 μM keine Zytotoxizität beobachtet wurde. Kombinationen davon mit Medikamenten der NRTI-Klasse (Abacavir, Didanosin, Emtricitabin, Lamivudin, Tenofovir und Zidovudin) führen zu synergistischen Wechselwirkungen. [1]

Bei Mäusen ist Lersivirine (UK-453061) nicht teratogen.[3]

• RT-Enzymtests

  Die Aktivitäten von Lersivirine (UK-453061) und Efavirenz gegen wt RT (BH10-Stamm) werden unter Verwendung eines Primer-Extensions-Assays bestimmt, der einen DNA/RNA-Primer/Template enthält. Die 5'-biotinylierte Primer-DNA ist ein 16mer Oligo(dT), das an eine Poly(rA)-Vorlage von ungefähr 300 Basen Länge angelagert ist. Die Inkoration von [³H]TTP(dTTP) durch Reverse Transkription führt zur Verlängerung des Primers. Während der Reaktion wird der Primer/Template an eine Streptavidin-beschichtete Flashplate (NEN) gebunden. Die inkorporierten tritiierten Nukleotide können dann das Szintillationsmittel stimulieren, um ein Signal zu erzeugen, das mit einem Szintillationszähler gemessen wird. Verbindungen, die die RNA-abhängige DNA-Polymerase-Aktivität von RT hemmen, erzeugen ein reduziertes Signal.

• Zelllinien

  SupT1 cells

• Konzentrationen

  increasing concentrations from 5 nM

• Inkubationszeit

  Every 7 days

• Methode

  For inhibitor escalation studies, SupT1 cells are initially infected with HIV-1 NL4-3 wt for 1 h at 37°C and the virus-infected cells are passaged weekly in SupT1 cells in the presence of increasing concentrations of lersivirine (UK-453061) from a starting concentration of 5 nM (IC50 in this assay system) in 12-well plates (6 × 10⁵ cells/well). Throughout the passaging period, ongoing virus replication is monitored weekly by observing cytopathic effects (syncytia). Every 7 days, virus supernatant is passaged onto fresh cells at the same density with fresh medium containing this compound. The concentration of it is increased by 2-fold and 5-fold that of the previous concentration upon subsequent passage whenever evidence of viral replication is observed. Virus stocks for phenotypic characterization are produced in SupT1 cells in the absence of compound and are tested for their sensitivity to lersivirine in an antiviral assay using HeLaP4 cells.

• Tiermodelle

  Mated Crl:CD1(ICR) mice

• Dosierungen

  150 mg/kg, 350 mg/kg, 500 mg/kg

• Verabreichung

  Oral gavage