UNC0631

Katalog-Nr.S7610 Charge:S761003

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Technische Daten

Formel

C₃₇H₆₁N₇O₂

Molekulargewicht

635.93

CAS-Nr.

1320288-19-4

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (157.25 mM)

Ethanol

100 mg/mL (157.25 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	5.000mg/ml (7.86mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

UNC 0631 ist ein potenter Inhibitor der Histone Methyltransferase G9a mit einer IC50 von 4 nM. Es reduziert potent H3K9me2-Spiegel in MDA-MB-231-Zellen mit einer IC50 von 25 nM.

Ziele

G9a

In vitro

In MCF7-, 22RV1- und IMR90-Zellen reduziert UNC0631 potent die H3K9me2-Spiegel und zeigt eine hervorragende Trennung der funktionellen Potenz gegenüber der Zellulartoxizität. Diese Verbindung kann somit als Werkzeug für die biomedizinische Forschungsgemeinschaft verwendet werden, um die Biologie von G9a und ihre Rolle bei der Chromatin-Remodellierung weiter zu untersuchen.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	SAHH-gekoppelte Assays Dieser Assay nutzt SAHH, um das Methyltransferprodukt SAH in Gegenwart von Adenosin-Deaminase, die Adenosin zu Inosin umwandelt, zu Homocystein und Adenosin zu hydrolysieren. Die Homocystein-Konzentration wird dann durch Konjugation ihrer freien Sulfhydrylgruppe an einen Thiol-sensitiven Fluorophor, ThioGlo, bestimmt. Für die IC50-Bestimmungen werden die Assay-Mischungen in 25 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01 % Triton X-100 mit 5 μM SAHH, 0,3 U/mL Adenosin-Deaminase, 25 μM SAM und 15 μM ThioGlo hergestellt. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 und SUV39H2 werden bei 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM bzw. 100 nM getestet. Diese Verbindung wird in Konzentrationen von 4 nM bis 16 μM zugegeben. Nach 2 min Inkubation werden die Reaktionen durch Zugabe der Histonpeptide initiiert: 10 μM H3(1–25) für G9a, 20 μM H3(1–25) für GLP, 100 μM H3(1–25) für SETD7, 500 μM H4(1–24) für SETD8, 10 μM H4(1–24) für PRMT3 und 200 μM H3K9Me1 (1–15) für SUV39H2. Die Methylierungsreaktion wird durch Überwachung der Fluoreszenzzunahme mit einem Biotek Synergy2 Plattenleser mit 360/40 nm Anregungsfilter und 528/20 nm Emissionsfilter für 20 min in einem 384-Well-Plattenformat verfolgt. Aktivitätswerte werden durch Subtraktion des durch das Peptid oder das Protein verursachten Hintergrunds korrigiert. IC50-Werte werden mit Sigmaplot berechnet. Standardabweichungen werden aus zwei unabhängigen Experimenten berechnet.
Zell-Assay:^[1]	Zelllinien MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells Konzentrationen ~10 μM Inkubationszeit 48 hours Methode MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Kinase-Assay:^{^[1]}

SAHH-gekoppelte Assays
Dieser Assay nutzt SAHH, um das Methyltransferprodukt SAH in Gegenwart von Adenosin-Deaminase, die Adenosin zu Inosin umwandelt, zu Homocystein und Adenosin zu hydrolysieren. Die Homocystein-Konzentration wird dann durch Konjugation ihrer freien Sulfhydrylgruppe an einen Thiol-sensitiven Fluorophor, ThioGlo, bestimmt. Für die IC50-Bestimmungen werden die Assay-Mischungen in 25 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01 % Triton X-100 mit 5 μM SAHH, 0,3 U/mL Adenosin-Deaminase, 25 μM SAM und 15 μM ThioGlo hergestellt. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 und SUV39H2 werden bei 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM bzw. 100 nM getestet. Diese Verbindung wird in Konzentrationen von 4 nM bis 16 μM zugegeben. Nach 2 min Inkubation werden die Reaktionen durch Zugabe der Histonpeptide initiiert: 10 μM H3(1–25) für G9a, 20 μM H3(1–25) für GLP, 100 μM H3(1–25) für SETD7, 500 μM H4(1–24) für SETD8, 10 μM H4(1–24) für PRMT3 und 200 μM H3K9Me1 (1–15) für SUV39H2. Die Methylierungsreaktion wird durch Überwachung der Fluoreszenzzunahme mit einem Biotek Synergy2 Plattenleser mit 360/40 nm Anregungsfilter und 528/20 nm Emissionsfilter für 20 min in einem 384-Well-Plattenformat verfolgt. Aktivitätswerte werden durch Subtraktion des durch das Peptid oder das Protein verursachten Hintergrunds korrigiert. IC50-Werte werden mit Sigmaplot berechnet. Standardabweichungen werden aus zwei unabhängigen Experimenten berechnet.

Zell-Assay:^[1]

Zelllinien
MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells
Konzentrationen
~10 μM
Inkubationszeit
48 hours
Methode
MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21780790/

Sellecks UNC0631 Wurde zitiert von 1 Publikation

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]

PubMed: 30135193

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