In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
Corn oil
Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.
5.000mg/ml
(9.81mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
UNC0638 ist eine potente, selektive und zellg
gige chemische Sonde f
G9a und GLP Histon-Methyltransferase mit IC50 von <15 nM bzw. 19 nM und zeigt Selektivit ber ein breites Spektrum epigenetischer und nicht-epigenetischer Ziele. Diese Verbindung hat antivirale Aktivit en.
Ziele
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
UNC0638 ist eine potente, selektive und zellg
gige chemische Sonde f
G9a und GLP, mit einem Toxizit /Funktions-Verh nis von >100, verglichen mit <6 f
BIX01294. Diese Verbindung ist ein selektiver Inhibitor von G9a und GLP er ein breites Spektrum epigenetischer und nicht-epigenetischer Ziele. Sie ist mehr als 10.000-fach selektiv gegen SET7/9 (eine H3K4 HMTase), SET8 (eine H4K20 HMTase), PRMT3 und SUV39H2. In MDA-MB-231-Zellen reduziert diese Chemikalie (48 h Exposition) die H3K9me2-Spiegel in einer konzentrationsabh
gigen Weise mit einer IC50 von 81 nM. Ihre Behandlung einer Vielzahl von Zelllinien f
t zu niedrigeren globalen H3K9me2-Spiegeln, bereinstimmend mit den Spiegeln, die f
den Small-Hairpin-RNA-Knockdown von G9a und GLP beobachtet wurden, wobei die funktionelle Potenz dieser Verbindung gut von ihrer Toxizit getrennt ist. Sie reduziert die Klonogenit von MCF7-Zellen deutlich, reduziert die H figkeit von H3K9me2-Markern an Promotoren bekannter G9a-regulierter endogener Gene und beeinflusst erproportional mehrere genomische Loci, die microRNAs kodieren. In embryonalen Mausstammzellen reaktiviert diese Sonde G9a-silencierte Gene und ein retrovirales Reportergen in einer konzentrationsabh
gigen Weise, ohne die Differenzierung zu f
dern.
In vivo
In pharmakokinetischen und metabolischen Studien an M usen zeigte UNC0638 eine hohe Clearance, eine kurze Halbwertszeit, ein hohes Verteilungsvolumen und eine geringe Exposition nach intraven
ser, oraler oder intraperitonealer Verabreichung. Obwohl diese Verbindung aufgrund geringer Expositionswerte wahrscheinlich nicht f
In-vivo-Tierstudien geeignet ist, machen ihre hohe Stabilit unter zellul
en Testbedingungen in Kombination mit hoher Potenz und Selektivit sie zu einem idealen chemischen Werkzeug f
zellbasierte Studien.
Dieser Assay nutzt SAHH, um das Methyltransferprodukt S-Adenosylhomocystein zu Homocystein und Adenosin zu hydrolysieren, in Anwesenheit von Adenosindesaminase, die Adenosin zu Inosin umwandelt. Die Homocystein-Konzentration wird dann durch Konjugation ihrer freien Sulfhydryl-Einheit an einen thiol-sensitiven Fluorophor, ThioGlo, bestimmt. F
IC50-Bestimmungen werden Assay-Mischungen in 25 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0,01 % Triton X 100 mit 5 M SAHH, 0,3 U/ml Adenosindesaminase, 25 M SAM und 15 M ThioGlo hergestellt. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 und SUV39H2 werden bei 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 M bzw. 100 nM getestet. UNC0638 wird in Konzentrationen von 4 nM bis 16 M zugegeben. Nach 2 Minuten Inkubation werden die Reaktionen durch Zugabe der Histonpeptide initiiert: 10 M H3(1-25) f
G9a, 20 M H3(1-25) f
EHMT1, 100 M H3(1-25) f
SETD7, 500 M H4(1-24) f
SETD8, 10 M H4(1-24) f
PRMT3 und 200 M H3K9Me1 (1-15) f
SUV39H2. Die Methylierungsreaktion wird durch berwachung der Fluoreszenzzunahme unter Verwendung eines Biotek Synergy2 Plattenlesers mit 360/40 nm Anregungsfilter und 528/20 nm Emissionsfilter f
20 min in einem 384-Well-Plattenformat verfolgt. Aktivit swerte werden durch Subtraktion des durch das Peptid oder das Protein verursachten Hintergrunds korrigiert. IC50-Werte werden mit Sigmaplot berechnet. Standardabweichungen werden aus zwei unabh
gigen Experimenten berechnet.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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