PLX4032 (Vemurafenib)

Katalog-Nr.S1267 Charge:S126714

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Technische Daten

Formel

C23H18ClF2N3O3S
Molekulargewicht 489.92 CAS-Nr. 918504-65-1
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.03 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Vemurafenib (PLX4032, RG7204, RO5185426) ist ein neuartiger und potenter Inhibitor von B-RafV600E mit einer IC50 von 31 nM im zellfreien Assay. 10-fach selektiv für B-RafV600E gegenüber Wildtyp-B-Raf in enzymatischen Assays, und die zelluläre Selektivität kann das 100-fache übersteigen. Vemurafenib (PLX4032, RG7204) induziert Autophagy.
Ziele
SRMS
(Cell-free assay)		 ACK1
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 C-Raf
(Cell-free assay)		 MAP4K5 (KHS1)
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
18 nM 19 nM 31 nM 48 nM 51 nM
In vitro Vemurafenib (PLX4032) hemmt B-RAFV600E, C-RAF sowie Wildtyp-B-RAF mit IC50-Werten von 31 nM, 48 nM bzw. 100 nM. Diese Verbindung hemmt auch mehrere Nicht-RAF-Kinasen, einschließlich ACK1, KHS1 und SRMS, mit IC50-Werten von 18 nM bis 51 nM. In Melanomzelllinien hängt die hemmende Wirkung vom B-RAF-Mutationsstatus ab, da sie B-RAF V600-Mutanten, einschließlich V600E, V600D, V600K und V600R, potent hemmt, jedoch nicht den Wildtyp oder andere Mutanten. Die IC50-Werte auf diesen Zellen, einschließlich MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28 und A2058, reichen von 20 nM bis 1 μM. In diesen Zellen hemmt Vemurafenib (0,1 μM bis 30 μM) auch die Phosphorylierung von MEK1/2 und ERK1/2. Es ist hochwirksam bei der Behandlung von Melanomen, aufgrund seiner Fähigkeit, B-RAFV600E zu hemmen. Diese Verbindung zeigt jedoch eine begrenzte Wirkung bei Darmkrebspatienten, die ebenfalls das B-RAFV600E Onkoprotein tragen. Der Grund dafür ist, dass in Darmkrebszellen die B-RAFV600E-Hemmung durch PLX4032 zu einer schnellen Rückkopplungsaktivierung von EGFR führt, die die PLX4032-gehemmte Zellproliferation kompensiert.
In vivo In B-RAFV600E-mutierten Maus-Xenograftmodellen hemmt Vemurafenib (PLX4032) (6 mg/kg–20 mg/kg) das Tumorwachstum. In Maus-Xenograftmodellen von LOX-, Colo829- und A375-Zellen hemmt diese Verbindung (12,5 mg/kg–100 mg/kg) das Tumorwachstum und verlängert das Überleben der Mäuse.
Merkmale Ein neuartiger und potenter Inhibitor des B-RAFV600E Onkoproteins.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • RAF-Kinaseaktivitätsmessungen

    Die Kinaseaktivitäten von Wildtyp-RAF und Mutanten werden durch Messung der Phosphorylierung von biotinyliertem BAD-Protein in Gegenwart von Vemurafenib (PLX4032) bestimmt. Für jedes Enzym (0,01 ng) werden 20 μL Reaktionen in 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01 % (v/v) Tween-20, 50 nM Biotin-BAD-Protein und 1 mM ATP bei Raumtemperatur durchgeführt. Die Reaktionen werden nach 5 min mit 5 μL einer Lösung gestoppt, die 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA, 0,3 % (w/v) Rinderserumalbumin (BSA) enthält. Die Stopplösung enthält außerdem einen Phospho-BAD (Ser112)-Antikörper, Streptavidin-beschichtete Donor-Beads und Protein-A-Akzeptor-Beads. Antikörper und Beads werden in Stopplösung im Dunkeln bei Raumtemperatur 30 min vorinkubiert. Die Endverdünnung des Antikörpers beträgt 1/2000 und die Endkonzentration jeder Bead beträgt 10 μg/mL. Die Assay-Platten werden eine Stunde bei Raumtemperatur inkubiert und dann mit einem PerkinElmer AlphaQuest-Lesegerät ausgelesen. Mutantenaktivitäten sind der Durchschnitt von zwei verschiedenen Chargen gereinigten Proteins, die in Duplikaten in drei verschiedenen Experimenten getestet wurden.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, and A2058 cells

  • Konzentrationen

    0–10 μM , dissolved in DMSO

  • Inkubationszeit

    5 days

  • Methode

    Cellular proliferation is evaluated by MTT assay. Briefly, cells are plated in 96-well microtiter plates at a density of 1000 to 5000 cells per well in a volume of 180 μL. Vemurafenib (PLX4032) is prepared at 10 times the final assay concentration in media containing 1% DMSO. Twenty-four hours after cell plating, 20 μL of the appropriate dilution of this compound are added to plates in duplicate. The plates are assayed for proliferation 6 days after the cells are plated. Percent inhibition is calculated and the IC50 is determined from the regression of a plot of the logarithm of the concentration versus percent inhibition.
Tierstudie:

[2]
  • Tiermodelle

    Mice (athymic nude) xenograft models of LOX, Colo829, and A375 cells

  • Dosierungen

    12.5 mg/kg–100 mg/kg

  • Verabreichung

    Oral gavage twice daily

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20823850/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20551065/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22281684/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15808862/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22180495/

Kundenproduktvalidierung

The regressing tumour microenvironment stimulates the outgrowth, infiltration and metastasis of drug-resistant clones. b, Bioluminescent signal of drug-resistant A375RTGL cells in vemurafenib-sensitive, A375 tumours, treated with vehicle or vemurafenib for 5 days (vehicle, n = 36; vemurafenib, n = 15 tumours). D, day. c, EdU incorporation in A375R-TGL cells in A375/A375R-TGL tumours treated with vehicle or vemurafenib for 4 days, as determined by FACS (vehicle, n = 8; vemurafenib, n = 6 tumours). d, Bioluminescent signal of A375R-TGL tumours alone, treated with vehicle or vemurafenib for 5 days (vehicle, n 5 38; vemurafenib, n = 15 tumours). e, Bioluminescent signal of TGLexpressing drug-resistant cancer cells (A375R, M249R4, PC9 and H2030) in drug-sensitive tumours (Colo800, LOX, UACC62, M249, H3122 and HCC827) treated with vehicle or drugs (vemurafenib, crizotinib and erlotinib) for 5 days (n (from left to right on the graph) = 6, 7, 12, 12, 9, 9, 25, 26, 9, 12, 12, 12, 16 and 11 tumours). f, Spontaneous lung metastasis by A375R cells in mice bearing A375/A375R-TGL tumours treated with vehicle or vemurafenib (10 days), visualized by BLI (n = 4).

Daten von [ Nature , 2015 , 520(7547), 368-72 ]

FRA1 downregulation during RAFi treatment drives the reactive secretome. c, Relative mRNA levels of FRA1 during vemurafenib exposure [0.1-1 uM]. d, Representative immunofluorescence staining of A375/A375R tumours for GFP (A375R, green) and FRA1 (red) after vehicle or vemurafenib treatment (5 days). DAPI, 49,6-diamidino-2-phenylindole. Scale bars, 50 um.

Daten von [ Nature , 2015 , 520(7547), 368-72 ]

The B-Raf inhibitor PLX4032 decreases cell surface DR5 levels . BCPAP cells were treated with the indicated concentrations of PLX4032 for 12 h and then harvested for extraction of cellular total RNA and subsequent RT-PCR to detection of DR5.

Daten von [ Oncogene , 2015 , 10.1038/onc.2015.97 ]

Acquired EGFR expression in BRAF(V600E) mutant melanoma after vemurafenib resistance. Immunohistochemical (IHC) analysis (ultraView DAB stain, brown) showing increased EGFR expression in formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) (Patient number 1-5) and frozen (Patient number 6) melanoma tissue sections from BRAF(V600E) mutant melanoma patients who developed resistance to vemurafenib, dabrafenib or trametinib as indicated. For each patient, the first biopsy is from the pre-treatment tumour; the second biopsy was performed after the tumour had progressed under treatment. For patient number 4, the first biopsy was performed when the patient was in partial response, but rapidly developed secondary resistance. Then 4.5 months later, the second biopsy was taken.

Daten von [ Nature , 2014 , 508(7494), 118-22 ]

Sellecks PLX4032 (Vemurafenib) Wurde zitiert von 714 Publikationen

Pan-inhibition of super-enhancer-driven oncogenic transcription by next-generation synthetic ecteinascidins yields potent anti-cancer activity [ Nat Commun, 2025, 16(1):512] PubMed: 39779693
Blocking interplay between TERT and c-Myc: a new therapeutic strategy for BRAFV600E/pTERT double mutated tumors [ Int J Biol Sci, 2025, 21(11):4961-4978] PubMed: 40860184
Downregulated ALDH2 Contributes to Tumor Progression and Targeted Therapy Resistance in Human Metastatic Melanoma Cells [ Cells, 2025, 14(12)913] PubMed: 40558540
Inter-Relationship Between Melanoma Vemurafenib Tolerance Thresholds and Metabolic Pathway Choice [ Cells, 2025, 14(12)923] PubMed: 40558548
Exploiting Paradoxical Activation of Oncogenic MAPK Signaling by Targeting Mitochondria to Sensitize NRAS Mutant-Melanoma to Vemurafenib [ Int J Mol Sci, 2025, 26(6)2675] PubMed: 40141318
Acquired resistance to vemurafenib restrains thyroid cancer stem cell self-renewal by suppressing STAT3 activation [ Cell Signal, 2025, 133:111845] PubMed: 40345509
Dihydrotanshinone I enhanced BRAF mutant melanoma treatment efficacy by inhibiting the STAT3/SOX2 signaling pathway [ Front Oncol, 2025, 15:1429018] PubMed: 39944829
Suppression of Sebum Production by Vemurafenib Through Paradoxical ERK Activation Resulted in the Inhibition of the mTOR Pathway in 5α-Dihydrotestosterone-Differentiated Hamster Sebocytes In Vitro [ Exp Dermatol, 2025, 34(8):e70150] PubMed: 40817681
Selective inhibition of p300 by a novel small molecule EPS496 promotes cell death in vemurafenib-resistant BRAFV600E mutated melanoma cells [ Biochem Biophys Res Commun, 2025, 750:151382] PubMed: 39884005
Increased Mitochondrial Superoxide Level Is Partially Associated With Vemurafenib-Induced Renal Tubular Toxicity [ Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2025, 136(4):e70015] PubMed: 40018909

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