WAY-600

Katalog-Nr.S2689 Charge:S268901

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Technische Daten

Formel

C₂₈H₃₀N₈O

Molekulargewicht

494.59

CAS-Nr.

1062159-35-6

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

WAY-600 ist ein potenter, ATP-kompetitiver und selektiver Inhibitor von mTOR mit einer IC50 von 9 nM; diese Verbindung blockiert mTORC1/P-S6K(T389) und mTORC2/P-AKT(S473), aber nicht P-AKT(T308); sie ist selektiver für mTOR als PI3Kα (>100-fach) und PI3Kγ (>500-fach).

Ziele

mTOR

9 nM

In vitro

Immunkomplex-Kinase-Assay zeigt, dass das mTORC2-spezifische Substrat His6-AKT oder das mTORC1-Substrat His6-S6K dosisabhängig durch WAY-600 gehemmt wird. Diese Verbindung hemmt die mTOR-Signalübertragung und die AKT-Funktion in zellulären Modellen dosisabhängig. Es hemmt die Cap-abhängige und globale Proteinsynthese in MDA361, menschlichen Brustkrebszellen, erheblich. Diese Chemikalie zeigt antiproliferative Wirkungen in verschiedenen Krebszelllinien, einschließlich G1-Zellzyklusarrest und selektiver Apoptose. Es reguliert angiogene Faktoren, VEGF und HIF-1α, in U87MG-, MDA361- und LNCap-Zellen herunter.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	DELFIA-Format von gereinigtem FLAG-TOR Die Routinetests mit gereinigtem FLAG-TOR (FL und 3.5) werden in 96-Well-Platten wie folgt durchgeführt. Enzyme werden zuerst in Kinase-Assay-Puffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-Glycerophosphat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM Microcystin LR und 100 lg/mL BSA) verdünnt. Zu jeder Vertiefung werden 12 μL des verdünnten Enzyms kurz mit 0.5 μL Testinhibitor oder Kontroll-Vehikel Dimethylsulfoxid (DMSO) gemischt. Die Kinase-Reaktion wird durch Zugabe von 12.5 μL Kinase-Assay-Puffer, der ATP und His6-S6K enthält, initiiert, um ein Endreaktionsvolumen von 25 μL zu ergeben, das 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP und 1.25 μM His6-S6K enthält. Die Reaktionsplatte wird 2 Stunden (linear bei 1–6 Stunden) bei Raumtemperatur unter leichtem Schütteln inkubiert und dann durch Zugabe von 25 μL Stopppuffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA und 20 mM EGTA) beendet. Die DELFIA-Detektion des phosphorylierten (Thr-389) His6-S6K wird bei Raumtemperatur unter Verwendung eines monoklonalen Anti-P(T389)-p70S6K-Antikörpers (1A5) durchgeführt, der mit Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu pro Antikörper) markiert ist. Fünfundvierzig Mikroliter des beendeten Kinase-Reaktionsgemisches werden auf eine MaxiSorp-Platte überführt, die 55 μL PBS enthält. Das His6-S6K darf 2 Stunden lang binden, wonach die Vertiefungen abgesaugt und einmal mit PBS gewaschen werden. Einhundert Mikroliter DELFIA-Puffer mit 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K-Antikörper werden hinzugefügt. Die Antikörperbindung wird 1 Stunde lang unter leichtem Rühren fortgesetzt. Die Vertiefungen werden dann abgesaugt und viermal mit PBS, das 0.05 % Tween 20 (PBST) enthält, gewaschen. Einhundert Mikroliter DELFIA-Enhancement-Lösung werden zu jeder Vertiefung hinzugefügt und die Platten werden in einem PerkinElmer Victor Modell Plattenlesegerät abgelesen. Die erhaltenen Daten werden verwendet, um die enzymatische Aktivität und die Enzyminhibition durch potenzielle Inhibitoren zu berechnen.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Konzentrationen 0-100 μM Inkubationszeit 24 or 48 hours Methode For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Kinase-Assay:^{^[1]}

DELFIA-Format von gereinigtem FLAG-TOR
Die Routinetests mit gereinigtem FLAG-TOR (FL und 3.5) werden in 96-Well-Platten wie folgt durchgeführt. Enzyme werden zuerst in Kinase-Assay-Puffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-Glycerophosphat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM Microcystin LR und 100 lg/mL BSA) verdünnt. Zu jeder Vertiefung werden 12 μL des verdünnten Enzyms kurz mit 0.5 μL Testinhibitor oder Kontroll-Vehikel Dimethylsulfoxid (DMSO) gemischt. Die Kinase-Reaktion wird durch Zugabe von 12.5 μL Kinase-Assay-Puffer, der ATP und His6-S6K enthält, initiiert, um ein Endreaktionsvolumen von 25 μL zu ergeben, das 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP und 1.25 μM His6-S6K enthält. Die Reaktionsplatte wird 2 Stunden (linear bei 1–6 Stunden) bei Raumtemperatur unter leichtem Schütteln inkubiert und dann durch Zugabe von 25 μL Stopppuffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA und 20 mM EGTA) beendet. Die DELFIA-Detektion des phosphorylierten (Thr-389) His6-S6K wird bei Raumtemperatur unter Verwendung eines monoklonalen Anti-P(T389)-p70S6K-Antikörpers (1A5) durchgeführt, der mit Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu pro Antikörper) markiert ist. Fünfundvierzig Mikroliter des beendeten Kinase-Reaktionsgemisches werden auf eine MaxiSorp-Platte überführt, die 55 μL PBS enthält. Das His6-S6K darf 2 Stunden lang binden, wonach die Vertiefungen abgesaugt und einmal mit PBS gewaschen werden. Einhundert Mikroliter DELFIA-Puffer mit 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K-Antikörper werden hinzugefügt. Die Antikörperbindung wird 1 Stunde lang unter leichtem Rühren fortgesetzt. Die Vertiefungen werden dann abgesaugt und viermal mit PBS, das 0.05 % Tween 20 (PBST) enthält, gewaschen. Einhundert Mikroliter DELFIA-Enhancement-Lösung werden zu jeder Vertiefung hinzugefügt und die Platten werden in einem PerkinElmer Victor Modell Plattenlesegerät abgelesen. Die erhaltenen Daten werden verwendet, um die enzymatische Aktivität und die Enzyminhibition durch potenzielle Inhibitoren zu berechnen.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Konzentrationen
0-100 μM
Inkubationszeit
24 or 48 hours
Methode
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Referenzen

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Sellecks WAY-600 Wurde zitiert von 3 Publikationen

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

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