Wortmannin (SL-2052)

Die Hemmung von MLCK durch Wortmannin wird nicht durch Calmodulin oder Peptidsubstrat beeinflusst, während sie durch eine hohe ATP-Konzentration reduziert wird. Diese Verbindung interagiert direkt mit der katalytischen Domäne von MLCK und führt zu einem irreversiblen Verlust der Enzymaktivität. Sie hat keine hemmende Wirkung auf cAMP-abhängige Proteinkinase, cGMP-abhängige Proteinkinase und Calmodulin-abhängige Proteinkinase II und hat nur geringe Auswirkungen auf die Proteinkinase C-Aktivität. [1]

Dieser Inhibitor hemmt die N-Formylmethionyl-Leucylphenylalanin (fMLP)-stimulierte PtdInsP3 (Phosphatidylinositol-3,4,5-Trisphosphat)-Bildung mit einer IC50 von 5 nM, und diese Hemmung wird vollständig aufgehoben, wenn menschliche Neutrophile mit 100 nM dieser Verbindung vorbehandelt werden, wobei die PtdInsP2-Spiegel erhöht sind und keine Auswirkungen auf die zellulären PtdInsP- und PtdIns-Gehalte bestehen. Es könnte oszillatorische Veränderungen im F-Aktin-Gehalt entwickeln und hemmt die fMLP-stimulierte Aktinpolymerisation in Neutrophilen nicht. [2]

Diese Chemikalie hemmt irreversibel die Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3-Kinase)-Aktivität durch Bindung an das 110-kDa-Protein (IC50 von 3 nM) und hat keine Wirkung auf PI4-Kinase in RBL-2H3-Zellen. Sie hemmt auch die Leukotrienfreisetzung, ohne die Aktivierung der Tyrosinkinase Lyn zu beeinflussen. [3]

Diese Verbindung unterdrückt die induzierte Hexoseaufnahme in isolierten Rattenadipozyten bei 0,1 μM vollständig, ohne die stimulierte lipolytische Aktivität zu beeinträchtigen. [4]

Es unterdrückt die induzierte Stickoxidproduktion um 50 % bei 500 nM in menschlichen Endothelzellen der Nabelvene, was eine Reaktion auf IGF-1 ist. [5]

Diese Chemikalie unterdrückt die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen (DSB) und hat keinen Einfluss auf die DSB-Spiegel oder die Kinetik der Einzelstrangbruch (SSB)-Reparatur in Chinesischen Hamster-Ovarialzellen bei 50 μM. Es könnte die durch ionisierende Strahlung (IR) induzierte Zytotoxizität verstärken, ohne selbst toxisch zu sein. [6]

Dieser Inhibitor hemmt die Polo-ähnliche Kinase (PLK1)-Aktivität mit einer IC50 von 24 nM in intakten G2/M-arretierten Zellen. [7]

Es erhöht die Toll-like Rezeptor (TLR)-vermittelte Akkumulation von IL-6 in menschlichen Makrophagen mit einer EC50 von 50 nM. Gleichzeitig verstärkt diese Verbindung die TLR-vermittelte induzierbare Stickoxid-Synthase (iNOS)-Expression und Nitritakkumulation in Mäusemakrophagen signifikant. Es aktiviert den nukleären Faktor-κB und reguliert die Zytokin-mRNA-Produktion hoch. [8]

Diese Chemikalie hemmt auch Polo-like kinase (PlK) 1 und PlK3, die wichtige Rollen bei der Mitose spielen. Ihre Behandlung könnte zu einer Reduktion der Phosphorylierung von p53 an Serin 20 führen, die durch DNA-Schäden induziert wird. [9]

Es unterdrückt die Hyaluronan-induzierte Akt-Phosphorylierung und Zellmotilität/Migration in SW1990-Zellen. [10]

Wortmannin hemmt die peritoneale Metastasierung von SW1990 bei Mäusen bei 1 mg/kg, ohne Gewichtsverlust. [10]

Diese Verbindung hemmt die Phosphatidylinositid-3-Kinase-Proteinkinase B (PKB)/Akt-Phosphorylierung sowohl in normalen Geweben (Lunge, Herz und Hirnhomogenate) als auch in Tumorgewebe bei Mäusen, ohne Mortalität oder akute Toxizität bei 0,7 mg/kg. In Kombination mit LY188011 erhöht diese Chemikalie signifikant die Apoptose und hemmt das Tumorwachstum bei orthotopischen Tumoren, während beide Monotherapien dies nicht konnten. [11]

• MLCK assay

  Die MLCK-Aktivität wird mit Peptidsubstrat (KKRPQRATSNVFS-NH₂) oder Myosin-Leichtkette bestimmt. Das Peptidsubstrat (24 μM) wird in einem Reaktionsgemisch phosphoryliert, das 25 mM Tris-HCl (pH 7,5), 0,5 mg/mL Rinderserumalbumin, 4 mM MgCl₂, 0,5 mM CaCl₂, 2,6 nM Calmodulin, 1,5 nM MLCK und 400 μM ATP in einem Endvolumen von 0,25 mL enthält. Nach einer 10-minütigen Vorinkubation bei 28 ºC ohne ATP wird die Reaktion durch Zugabe von ATP bei 28 ºC gestartet und nach 30 min durch Zugabe von 0,1 mL 10 % (v/v) Essigsäure beendet. Das Gemisch wird mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie analysiert: Säule, Unisil Pack 5C18 4,6 x 150 mm; Lösungsmittel, 18 % (v/v) Acetonitril, 0,1 % (v/v) Trifluoressigsäure in Wasser; Flussrate, 1,0 mL/min; Temperatur, 40 ºC; Detektion, Absorption bei 220 nm. Der Reaktionsprozentsatz wird aus dem Verhältnis der Peakflächen der phosphorylierten Form zu denen der unphosphorylierten Form berechnet. Die unter den oben beschriebenen Bedingungen gemessene spezifische Aktivität beträgt 0,81 μmol/min/mg. Myosin-Leichtkette (108 μg/mL) wird in einem Reaktionsgemisch phosphoryliert, das 25 mM Tris-HCl (pH 7,5), 0,5 mg/mL Rinderserumalbumin, 4 mM MgCl₂, 0,5 mM CaCl₂, 4,2 nM Calmodulin, 0,92 nM Enzym und 10 μM [γ-³²P]ATP (100-900 cpm/pmol) in einem Endvolumen von 0,25 mL enthält. Nach einer 3-minütigen Vorinkubation bei 30 ºC ohne ATP wird die Reaktion durch Zugabe von [γ-32P]ATP bei 30 ºC gestartet und nach 5 min durch Zugabe von 0,125 mL Trichloressigsäure gestoppt. Die säurefällbaren Materialien werden auf einem Nitrozellulosemembranfilter gesammelt und mit vier 1-mL-Aliquoten von 5 % (v/v) Trichloressigsäure gewaschen. Die Radioaktivität auf dem Filter wird in einem Toluol-Szintillationsfluid mit einem Packard Tri-Carb Flüssigszintillationsspektrometer Modell 4530 gemessen. Die unter diesen Bedingungen gemessene spezifische Aktivität beträgt 1,23 μmol/min/mg. [1]

• Zelllinien

  NK cells

• Konzentrationen

  1 μM

• Inkubationszeit

  1 h

• Methode

  Primary NK cells were pretreated with wortmannin (1 μM) for 1 h, washed twice with RPMI 1640, and then treated with IL-15 (10 ng/mL) for 24 h. DMSO was used as control.

• Tiermodelle

  Human pancreatic adenocarcinoma cells PK1 are injected both s.c. and orthotopically into SCID mice.

• Dosierungen

  0.175, 0.35, and 0.7 mg/kg

• Verabreichung

  Injected by i.v.