WYE-125132 (WYE-132)

Katalog-Nr.S2661 Charge:S266101

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Technische Daten

Formel

C27H33N7O4
Molekulargewicht 519.6 CAS-Nr. 1144068-46-1
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 104 mg/mL (200.15 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
30%PEG400 0.5%Tween80 5%propylene glycol

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 30.000mg/ml (57.74mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung WYE-125132 (WYE-132) ist ein hochwirksamer, ATP-kompetitiver mTOR-Inhibitor mit einer IC50 von 0,19 nM; er ist hochselektiv für mTOR gegenüber PI3Ks oder PI3K-verwandten Kinasen hSMG1 und ATR.
Ziele
mTOR
(Cell-free assay)
0.19 nM
In vitro WYE-125132 (WYE-132) hemmt rekombinante mTOR-Kinase potent und ATP-kompetitiv mit einer IC50 von 0,19 nM und zeigt auch eine hohe Selektivität gegenüber verschiedenen PI3Ks und einem Panel von 230 Proteinkinasen. In vitro zeigt es eine signifikante antiproliferative Aktivität gegen ein Panel von Tumorzelllinien mit IC50-Werten von 2 nM (LNCap) bis 380 nM (HTC116). Außerdem bewirkt diese Verbindung auch eine Zellzyklusprogression, die Induktion von Apoptose und die Hemmung der Proteinsynthese und Zellgröße. Es führt zu einer signifikanten Reduktion der Synthese von prä-tRNALeu um 72 %, 80 % und 53 % in aktiv proliferierenden Zellen von MG63, MDA361 bzw. HEK293 durch Hemmung von mTORC1. Darüber hinaus wird festgestellt, dass WYE-125132 auch die Dephosphorylierung von Maf1 (negativer Regulator der Pol III-Transkription) und dessen Akkumulation im Zellkern induziert.
In vivo WYE-125132 (WYE-132) (5 mg/kg p.o.) erzeugt eine signifikante Antitumoraktivität und verursacht eine dosisabhängige Verzögerung des Tumorwachstums im PI3K/mTOR- und HER2-hyperaktiven MDA361-Tumormodell. Darüber hinaus zeigt es auch eine potente Antitumorwirksamkeit in den PTEN-null-Gliom-U87MG-, nicht-kleinzelligem Lungenkrebs-H1975- und A549-Modellen.
Merkmale Ein hochwirksamer, ATP-kompetitiver und spezifischer mTOR-Kinaseinhibitor.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Kinase-Assays

    mTOR-Enzymassays mittels Dissociations-Enhanced Lanthanide Fluorescent Immunoassay (DELFIA), ATP-Matrix-Assays und mTOR-Immunkomplex-Kinase-Assays werden wie folgt für WYE-125132 (WYE-132) durchgeführt. Das endogene TOR aus LNCap-Zelllysat wird durch Anti-FRAP/TOR (N-19) immunpräzipitiert. Zelllysat (1,0 mg) wird mit 4 μg Antikörper, gekoppelt an Protein-G/A-Agarose, in 1 ml Lysebuffer gemischt. Die Immunkomplexe werden nacheinander mit Lysebuffer, Lysebuffer plus 500 mM KCl und Kinasebuffer-Waschlösung gewaschen. Die Immunkomplexe werden 30 Minuten lang bei 30 °C in einem Endvolumen von 50 μl, das 10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-Glycerophosphat und 0,5 μM Microcystin LR, 1 mM DTT, 10 mM MnCl2, 100 μM ATP, 1 μg His6-S6K oder 1 μg His6-4EBP1 enthält, einer Kinase-Reaktion unterzogen. Kinase-Reaktionen (Immunkomplex und gereinigte Enzyme) werden durch NuPAGE LDS-Probenpuffer beendet und in einem 4-12% NuPAGE Bis-Tris-Gel für Western Blotting mit Anti-P(T389)-p70S6K und Anti-P(T46)-4EBP1, Anti-FRAP/TOR (N-19), Anti-FLAG M2 und Anti-His6 (Klon His-1) aufgetrennt. Im radioaktiven Assay werden 10 μCi [γ-32P]ATP (3000 Ci/mmol) und 100 μM kaltes ATP verwendet. 32P-markierte Produkte werden durch SDS-PAGE aufgetrennt und einem Autoradiogramm auf Kodak-Röntgenfilmen unterzogen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa

  • Konzentrationen

    0 to 10 μM

  • Inkubationszeit

    24 hours

  • Methode

    Cell lines of MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa are obtained from the American Type Culture Collection. Cell growth assays and IC50 determination are described as follows. For tumor cell growth assays, cells are plated in 96-well culture plates at 1000 to 3000 cells per well for 24 hours, treated with DMSO or various doses of WYE-125132 (WYE-132). Viable cell densities are determined three days later by MTS assay employing an assay kit following the kit assay protocol. The effect of each treatment is calculated as percent of control growth relative to the DMSO-treated cells grown in the same culture plate. Inhibitor dose response curves are plotted for determination of IC50 values.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    U87MG, MDA361, H1975, A549, A498, and 786-O cells are injected s.c. into the right flank of CD1 nu/nu mice.

  • Dosierungen

    ≤50 mg/kg

  • Verabreichung

    Administered via i.v. or p.o.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20068177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20233713/

Kundenproduktvalidierung

SW620 and SW620:8055R cells were treated with increasing concentrations of WYE-125132 for 24 hours and cell proliferation was assayed by [<sup>3</sup>H]thymidine incorporation. Results are the mean盋oV for three biological replicates from a single experiment; identical results were obtained in n=3 experiments.

Daten von [ J Cell Sci , 2014 , 127(Pt 4), 788-800 ]

Sellecks WYE-125132 (WYE-132) Wurde zitiert von 9 Publikationen

Suppression of MYC by PI3K/AKT/mTOR pathway inhibition in combination with all-trans retinoic acid treatment for therapeutic gain in acute myeloid leukaemia [ Br J Haematol, 2022, 10.1111/bjh.18187] PubMed: 35468223
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Expression of HYOU1 via Reciprocal Crosstalk between NSCLC Cells and HUVECs Control Cancer Progression and Chemoresistance in Tumor Spheroids [ Mol Cells, 2021, 44(1):50-62] PubMed: 33455947
An evolutionarily young defense metabolite influences the root growth of plants via the ancient TOR signaling pathway [ Elife, 2017, 6e29353] PubMed: 29231169
mTOR inhibitors activate PERK signaling and favor viability of gastrointestinal neuroendocrine cell lines [ Oncotarget, 2017, 8(13):20974-20987] PubMed: 28423496
Rapalogs can promote cancer cell stemness in vitro in a Galectin-1 and H-ras-dependent manner [ Oncotarget, 2017, 8(27):44550-44566] PubMed: 28562352
Adaptation to mTOR kinase inhibitors by amplification of eIF4E to maintain cap-dependent translation. [Cope CL, et al. J Cell Sci, 2014, 127(Pt 4):788-800] PubMed: 24363449
Deciphering Combinations of PI3K/AKT/mTOR Pathway Drugs Augmenting Anti-Angiogenic Efficacy In Vivo [Sasore T, et al PLoS One, 2014, 9(8):e105280] PubMed: 25144531
Murine dendritic cell rapamycin-resistant and rictor-independent mTOR controls IL-10, B7-H1, and regulatory T-cell induction. [ Blood, 2013, 121(18):3619-30] PubMed: 23444404

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