WZ4003

Katalog-Nr.S7317 Charge:S731701

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Technische Daten

Formel

C₂₅H₂₉ClN₆O₃

Molekulargewicht

496.99

CAS-Nr.

1214265-58-3

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

10 mg/mL (20.12 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.350mg/ml (0.70mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.350mg/ml (0.70mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

WZ4003 ist ein hochspezifischer NUAK-Kinase-Inhibitor mit einem IC50 von 20 nM und 100 nM für NUAK1 bzw. NUAK2 in zellbasierten Assays, ohne signifikante Hemmung von 139 anderen Kinasen.

Ziele

NUAK1 (Cell-free assay)	NUAK2 (Cell-free assay)
20 nM	100 nM

In vitro

In HEK-293-Zellen, die Wildtyp-NUAK1 exprimieren, unterdrückt WZ4003 (3–10 μM) die NUAK1-vermittelte MYPT1-Phosphorylierung deutlich. Darüber hinaus hemmt diese Verbindung (10 μM) die MYPT1-Ser445-Phosphorylierung sowie die Zellmigration, Invasion und Proliferation in ähnlichem Maße wie das Knockout von NUAK1 in MEFs oder das Knockdown in U2OS-Zellen. Es weist auch eine hohe, spezifische Affinität zum L858R/T790M-Mutanten EGFR auf, während eine signifikant reduzierte zelluläre IC50 gegenüber T790M-haltigen Ba/F3-Zellen beobachtet wird.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	IC50-Bestimmung Aktive GST–NUAK1-, GST–NUAK1[A195T]- und GST–NUAK2-Enzyme werden mittels Glutathion-Sepharose aus HEK-293-Zelllysaten 36–48 h nach transienter Transfektion von pEBG2T-Säugetierkonstrukten, die N-terminal GST-getaggtes NUAK1, NUAK1[A195T] oder NUAK2 exprimieren, gereinigt. Für Peptidkinase-Assays werden 96-Well-Platten verwendet, und jede Reaktion wird in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Jede Reaktion wird in einem Gesamtvolumen von 50 μL angesetzt, das 100 ng NUAK1 (Wildtyp oder A195T-Mutante) oder NUAK2 in 50 mM Tris/HCl (pH 7,5), 0,1 mM EGTA, 10 mM Magnesiumacetat, 200 μM Sakamototid, 0,1 mM [γ -³²P]ATP (450–500 c.p.m./pmol) und die angegebenen Konzentrationen der in DMSO gelösten Inhibitoren enthält. Nach 30-minütiger Inkubation bei 30 °C werden die Reaktionen durch Zugabe von 25 mM (Endkonzentration) EDTA zur Chelatbildung des Magnesiums beendet. Anschließend werden 40 μL des Reaktionsgemisches auf P81-Papier getropft und in 50 mM Orthophosphorsäure getaucht. Die Proben werden dreimal in 50 mM Orthophosphorsäure gewaschen, gefolgt von einer einzigen Acetonspülung und Lufttrocknung. Die Inkorporation von [γ -³²P]ATP in Sakamototid wird durch Cerenkov-Zählung quantifiziert. Die Werte werden als Prozentsatz der DMSO-Kontrolle ausgedrückt. IC50-Kurven werden entwickelt und IC50-Werte werden mit der GraphPad Prism Software berechnet.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien U2OS cells, and MEFs Konzentrationen ~10 μM Inkubationszeit 5 days Methode Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer’s protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

Kinase-Assay:^{^[1]}

IC50-Bestimmung
Aktive GST–NUAK1-, GST–NUAK1[A195T]- und GST–NUAK2-Enzyme werden mittels Glutathion-Sepharose aus HEK-293-Zelllysaten 36–48 h nach transienter Transfektion von pEBG2T-Säugetierkonstrukten, die N-terminal GST-getaggtes NUAK1, NUAK1[A195T] oder NUAK2 exprimieren, gereinigt. Für Peptidkinase-Assays werden 96-Well-Platten verwendet, und jede Reaktion wird in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Jede Reaktion wird in einem Gesamtvolumen von 50 μL angesetzt, das 100 ng NUAK1 (Wildtyp oder A195T-Mutante) oder NUAK2 in 50 mM Tris/HCl (pH 7,5), 0,1 mM EGTA, 10 mM Magnesiumacetat, 200 μM Sakamototid, 0,1 mM [γ -³²P]ATP (450–500 c.p.m./pmol) und die angegebenen Konzentrationen der in DMSO gelösten Inhibitoren enthält. Nach 30-minütiger Inkubation bei 30 °C werden die Reaktionen durch Zugabe von 25 mM (Endkonzentration) EDTA zur Chelatbildung des Magnesiums beendet. Anschließend werden 40 μL des Reaktionsgemisches auf P81-Papier getropft und in 50 mM Orthophosphorsäure getaucht. Die Proben werden dreimal in 50 mM Orthophosphorsäure gewaschen, gefolgt von einer einzigen Acetonspülung und Lufttrocknung. Die Inkorporation von [γ -³²P]ATP in Sakamototid wird durch Cerenkov-Zählung quantifiziert. Die Werte werden als Prozentsatz der DMSO-Kontrolle ausgedrückt. IC50-Kurven werden entwickelt und IC50-Werte werden mit der GraphPad Prism Software berechnet.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
U2OS cells, and MEFs
Konzentrationen
~10 μM
Inkubationszeit
5 days
Methode
Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer’s protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24171924/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20033049/

Kundenproduktvalidierung

: , , J Cell Mol Med, 2017, 21(7):1411-1419

: Daten von [ , , Brain Behav Immun, 2018, 72:89-100 ]

Sellecks WZ4003 Wurde zitiert von 15 Publikationen

NUAK1 activates STAT5/GLI1/SOX2 signaling to enhance cancer cell expansion and drives chemoresistance in gastric cancer [ Cell Rep, 2024, 43(7):114446]	PubMed: 38996065
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3):1411.]	PubMed: 38338691
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung Adenocarcinoma A549 Cells and Normal Lung Epithelial Cells [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3)1411]	PubMed: 38338691
Localized Inhibition of Protein Phosphatase 1 by NUAK1 Promotes Spliceosome Activity and Reveals a MYC-Sensitive Feedback Control of Transcription. [ Mol Cell, 2020, 77(6):1322-1339]	PubMed: 32006464
Dual targeting of NUAK1 and ULK1 using the multitargeted inhibitor MRT68921 exerts potent antitumor activities [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):712]	PubMed: 32873786
Microglia-Derived Extracellular Vesicles Carrying miR-711 Alleviate Neurodegeneration in a Murine Alzheimer's Disease Model by Binding to Itpkb [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:566530]	PubMed: 33240878
Safflor yellow A protects vascular endothelial cells from ox-LDL-mediated damage [ J Recept Signal Transduct Res, 2020, 1-8]	PubMed: 33167774
WZ4003 sensitizes non-small cell lung cancer cells to gefitinib via inhibition of ARK5 and epithelial-to-mesenchymal transition [ Am J Transl Res, 2020, 12(11):7377-7385]	PubMed: 33312374
Endothelial HNF4α potentiates angiogenic dysfunction via enhancement of vascular endothelial growth factor resistance in T2DM. [ J Cell Biochem, 2019, 120(8):12989-13000]	PubMed: 30873661
An Ancient Chinese Herbal Decoction Containing Angelicae Sinensis Radix, Astragali Radix, Jujuba Fructus, and Zingiberis Rhizoma Recens Stimulates the Browning Conversion of White Adipocyte in Cultured 3T3-L1 Cells. [ Evid Based Complement Alternat Med, 2019, 2019:3648685]	PubMed: 31316571

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