Y16

Y16 bindet mit einer Kd von ca. 80 nM an die Verbindungsstelle der DH-PH-Domänen von LARG und unterdrückt die LARG-katalysierte RhoA-Aktivierung dosisabhängig. Es blockiert die Interaktion von LARG und verwandten G-Protein-gekoppelten Rho GEFs mit RhoA, ohne einen nachweisbaren Effekt auf andere Rho GEFs der DBL-Familie, Rho-Effektoren oder eine RhoGAP zu haben. In Zellen hemmt diese Verbindung selektiv die seruminduzierte RhoA-Aktivität und die RhoA-vermittelte Signalgebung, Effekte, die durch ein konstitutiv aktives RhoA- oder ROCK-Mutant gerettet werden können. Durch die Unterdrückung der RhoA-Aktivität hemmt es die mammäre Sphärenbildung von MCF7-Brustkrebszellen, beeinflusst jedoch nicht die nicht-transformierenden MCF10A-Zellen. Diese Chemikalie wirkt synergistisch mit Rhosin/G04, einem Inhibitor der Rho-GTPase-Aktivierungsstelle, bei der Hemmung der LARG-RhoA-Interaktion, der RhoA-Aktivierung und der RhoA-vermittelten Signalfunktionen. Es hemmt effektiv das Wachstum, die Migration und die Invasionsaktivitäten von Brustkrebszellen[1].

• Zelllinien

  PC-3 cells

• Konzentrationen

  10 μM

• Inkubationszeit

  36 h

• Methode

  PC-3 cells were quiesced in RPMI1640 containing 0.5% FBS for 24 hr. Cells were then trypsinized, resuspended in RPMI1640 containing 0.5% FBS, and counted. A total of 2.5 × 10⁴ cells were loaded into the upper chamber. The lower chamber was filled with RPMI1640 supplemented with 10% FCS. A13 (10 μM), A2 (10 μM), Y16 (10 μM), or DMSO was added both in the upper and lower chambers. The concentration of DMSO in the medium was 0.1% for all experimental conditions. After a 36 hr incubation period, the cell suspension was aspirated, and the membranes were fixed in 70% ethanol at -20℃ for 20 min. Cells that had attached but not migrated were removed, the membranes were rinsed in water, and migrated cells on the underside of the membrane were visualized with staining in 2% crystal violet. Cells were counted on three independent transwell membranes using a light microscope.