Zotarolimus (ABT-578)

Zotarolimus (ABT-578) ist ein halbsynthetisches Rapamycin-Analogon, das durch den Ersatz einer Hydroxylgruppe an Position 42 im Rapamycin durch einen Tetrazolring hergestellt wird. Diese Verbindung ist hochwirksam bei der Hemmung der Proliferation von glatten Muskelzellen und Endothelzellen, mit IC50-Werten von 2,9 nM bzw. 2,6 nM. [1] Es ist mechanistisch ähnlich zu Sirolimus, da es eine hohe Affinität zur Immunophilin FKBP12 aufweist und eine vergleichbare Potenz zur Hemmung der In-vitro-Proliferation von menschlichen und Rattent-Zellen besitzt. Zotarolimus hemmt die Con A-induzierte Proliferation menschlicher T-Zellen und Rattent-Zellen mit IC50 von 7,0 nM bzw. 1337 nM. [2]

Zotarolimus (ABT-578) reduziert effektiv die Neointima-Bildung in einem 28-Tage, gut charakterisierten Schweinemodell der Koronararterienrestenose. Es scheint wirksam bei der Verhinderung der neointimalen Verdickung zu sein, indem es den späten Verlust von 1,03 auf 0,62 mm reduziert, mit einer 47%igen Reduzierung des TVF im Vergleich zu Bare Metal Stents (15,4% mit dem Driver Stent auf 8,1% mit dem Endeavor Stent). [1] Diese Verbindung ist wirksam bei der Unterdrückung von Adjuvans-DTH, EAE und kardialer Allograft-Abstoßung mit ED50-Werten von 1,72, 1,17 bzw. 3,71 mg/kg/Tag. [2]

• Bindungsaffinität zu FKBP12

  96-Well-Mikrotiterplatten werden zuerst mit FKBP-12 CMP-KDO-Synthetase-Fusionsprotein bei 10 μg/mL, 100 μL/Well für 2-3 h beschichtet, gefolgt von der Zugabe von 50 μL/Well Puffer A (2 % BSA und 0,2 % Tween-20 in D-PBS) für 30-60 min. Die Mikrotiterplatten werden dann dreimal mit Puffer B (0,2 % Tween in D-PBS, pH auf 7,4 eingestellt) gewaschen. Fünfzig Mikroliter Puffer A (für Maximum), 20 μM FK506 in Puffer A (für Hintergrund) oder verschiedene Konzentrationen von Zotarolimus (ABT-578) (10 pM-1 μM) in Puffer A werden zu jeder Vertiefung gegeben, gefolgt von der Zugabe von 50 μL A-79397 (ein FK506-Analogon)-Alkalische-Phosphatase-Konjugat in Puffer A. Die Mikrotiterplatten werden bei Raumtemperatur für 2-2,5 h inkubiert, gefolgt von drei Wäschen mit Puffer B. Etwa 100 μL pNPP (p-Nitrophenylphosphat) in 0,1 M Aminomethylpropanol werden zu jeder Vertiefung gegeben und die Platten werden bei Raumtemperatur für 90-120 min inkubiert. Die Absorption bei 405 nM wird mit einem ELISA-Plattenlesegerät abgelesen

• Zelllinien

  Human coronary artery cells

• Konzentrationen

  ~1 μM

• Inkubationszeit

  5 days

• Methode

  Cell proliferation is assayed by measuring tritiated thymidine incorporation in vitro. Human coronary artery cells (hCa) are seeded into tissue culture flasks for expansion and applied to 96-well plates at desired density in complete media (5000 hCaSMC; 10 000 hCaEC). After 2 days, complete media is replaced with incomplete media to synchronize cells and induce G0 state. Two days later, incomplete media are removed and replaced with complete media (serum/growth factors) to induce G0 to G1 transition. Complete media also contain Zotarolimus (ABT-578) at desired concentrations to determine its effects on cell proliferation. On day 7, ³H-thymidine is added to cells to monitor DNA synthesis, and cells are harvested after overnight incorporation of radioactivity. After an incubation period of 72 h, 25 μL (1 μCi/well) of ³H-thymidine are added to each well. The cells are incubated at 37°C for 16-18 h to allow for incorporation of ³H-thymidine into newly synthesized DNA and the cells harvested onto 96-well plates containing bonded glass fibre filters . The filter plates are air-dried overnight, MicroScint-20 (25 μL) added to each filter well and counted. Drug activity is determined by the inhibition of ³H-thymidine incorporation into newly synthesized DNA relative to cells grown in complete media.

• Tiermodelle

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosierungen

  2.5 mg/kg

• Verabreichung

  intravenous or oral