DBeQ p97 inhibiteur

Rapidly and potently induces activation of executioner caspases and cell death.

DBeQ bloque la dégradation d'UbG76V-GFP, ODD-Luc et Luc-ODC avec une IC50 de 2,6 μM, 56 μM et 45 μM respectivement dans les cellules HeLa. Ce composé est au moins 50 fois moins puissant envers le facteur sensible au N-éthylmaléimide (NSF) et le protéasome 26S. Il inhibe p97 de manière compétitive par rapport à l'ATP, avec un Ki de 3,2 μM, suggérant qu'il se lie au site actif du domaine D2. Ce composé (10 μM) bloque puissamment la dégradation de TCRα-GFP dans les cellules HEK293. Il induit le CHOP en 3 heures de manière concentration-dépendante mais n'augmente pas le niveau de p21 dans les cellules HEK293. Ce composé (15 μM) induit une forte accumulation de LC3-II dans le noyau ainsi que dans les fractions enrichies en membrane et cytosoliques des cellules HeLa. Il agit en bloquant la dégradation autophagique de LC3-II au lieu d'induire l'autophagie dans les cellules HeLa. Ce composé (10 μM) favorise rapidement l'activation des caspases exécutrices-3 et -7 dans les cellules HeLa. Il active la voie apoptotique intrinsèque de la caspase-9 plus que la voie extrinsèque de la caspase-8, tandis que le STS active les deux voies à un degré similaire. Ce composé est cinq fois plus actif contre les cellules de myélome multiple (RPMI8226) que les fibroblastes pulmonaires fœtaux humains normaux (MRC5), les cellules HeLa et Hek293 montrant des sensibilités intermédiaires. [1] Il présente une sélectivité de 20 fois pour la stabilisation des substrats rapporteurs UPS dépendants de p97 par rapport aux substrats indépendants dans les cellules HeLa. Ce produit chimique altère la dégradation des substrats dans les voies ERAD et d'autophagie. [2] Il (12 μM) inhibe la neutralisation intracellulaire de manière dose-dépendante dans les cellules HeLa. Ce composé (10 μM), qui inhibe complètement la dégradation du virus et de l'anticorps dans l'expérience de la destinée de la capside, ne parvient pas à empêcher la dégradation de l'IgG Fc. Il (9 μM) réduit le gradient initial de neutralisation en fonction de la concentration d'anticorps. [3] Ce composé diminue à la fois la phosphorylation basale et stimulée par les nutriments des cibles MTOR, similaire aux effets de la rapamycine dans les cellules U20S. [4]

Test ATPase manuel

Le tampon d'essai [20 μL d'une concentration 2,5×, où 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl₂, 1 mM EDTA et 0,5 mM tris(2-carboxyéthyl)phosphine (TCEP)] est distribué dans chaque puits d'une plaque à 96 puits. Le p97 purifié (25 μL de 50 μM) est dilué dans 975 μL de tampon d'essai 1×, et 10 μL sont distribués dans chaque puits. Ce composé (10 μL) ou 5% de DMSO (10 μL) est ensuite ajouté à chaque puits, et la plaque est incubée à température ambiante pendant 10 min. Le test ATPase est effectué en ajoutant à chaque puits 10 μL d'ATP 500 μM (pH 7,5), en incubant à température ambiante pendant 60 min, puis en ajoutant 50 μL de réactif Kinase Glo Plus, suivi d'une incubation finale de 10 min à température ambiante dans l'obscurité. La luminescence est lue sur un Analyst AD. Ce produit chimique est testé à une gamme de concentrations (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 et 30 μM) en triple.