Home Autophagy LRRK2 remmer LRRK2-IN-1

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

LRRK2-IN-1 LRRK2 remmer

Cat.Nr.S7584

LRRK2-IN-1 is een krachtige en selectieve LRRK2-remmer met een IC50 van respectievelijk 6 nM en 13 nM voor LRRK2 (G2019S) en LRRK2 (WT).
LRRK2-IN-1 LRRK2 remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 570.69

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: S758401 DMSO]100 mg/mL]false]Ethanol]100 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.61%
99.61

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
HEK293 cells Function assay Inhibition of LRRK2 G2019S mutant expressed in HEK293 cells using nictide and ATP as substrate, IC50=0.006 μM
HEK293 cells Function assay 0.03-3 μM 90 mins Inhibition of wild-type LRRK2 phosphorylation at Ser935 expressed in HEK293 cells at 0.03 to 3 uM after 90 mins by immunoblot analysis
lymphoblastoid cells Function assay 0.03 to 3 uM 90 mins Inhibition of LRRK2 in human lymphoblastoid cells assessed as inhibition of Ser910 autophosphorylation at 0.03 to 3 uM after 90 mins by immunoblot method
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht 570.69 Formule

C31H38N8O3

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 1234480-84-2 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CN1CCN(CC1)C2CCN(CC2)C(=O)C3=CC(=C(C=C3)NC4=NC=C5C(=N4)N(C6=CC=CC=C6C(=O)N5C)C)OC

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (175.22 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC50/Ki
LRRK2 (G2019S)
(Cell-free assay)
6 nM
LRRK2 (WT)
(Cell-free assay)
13 nM
DCLK2
(Cell-free assay)
45 nM
In vitro
In HEK 293-cellen die stabiel GFP-LRRK2[G2019S] tot expressie brengen, verandert LRRK2-IN-1 de cytoplasmatische lokalisatie van LRRK2. In van de mens afgeleide neuroblastoom SHSY5Y-cellen en muis Swiss 3T3-cellen induceert deze verbinding een vergelijkbare dosisafhankelijke Ser910- en Ser935-defosforylering en verlies van 14-3-3-binding aan endogeen LRRK2. In transgene C. elegans die menselijk R1441C- en G2019S-LRRK2 tot expressie brengen, herstelt het het gedragsdefect dat kenmerkend is voor dopaminerge stoornissen. In muizenfibroblasten vermindert deze chemische stof de celmotiliteit. In de cellijnen AsPC-1 en HCT116 vertoont het antiproliferatieve en pro-apoptotische eigenschappen, induceert het G1- en G2/M-celcyclusarrest en remt het de DCLK1 mRNA- en eiwitexpressie.
Kinase Assay
IC50 bepaling
Actief GST-LRRK2 (1326-2527), GST-LRRK2 [G2019S] (1326-2527), GST-LRRK2 [A2016T] (1326-2527) en GST-LRRK2 [A2016T+G2019S] (1326-2527) enzym wordt gezuiverd met glutathionsepharose uit HEK293-celysaat 36 uur na transiënte transfectie van de geschikte cDNA-constructen. Peptidekinase-assays, in duplo uitgevoerd, worden opgezet in een totaal volume van 40 µL met 0,5 µg van deze verbinding (wat bij ongeveer 10% zuiverheid een uiteindelijke concentratie van 8 nM geeft) in 50 mM Tris/HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 20 µM Nictide, 0.1 µM [γ-32P]ATP (~500 cpm/pmol) en de aangegeven concentraties van remmer opgelost in DMSO. Na incubatie gedurende 15 min bij 30 °C worden de reacties beëindigd door 35 µL van het reactiemengsel op P81-fosfocellulosepapier te druppelen en onder te dompelen in 50 mM fosforzuur. Monsters worden uitgebreid gewassen en de incorporatie van [γ-32P]ATP in Nictide wordt gekwantificeerd door Cerenkov-telling. IC50-waarden worden berekend met GraphPad Prism met behulp van niet-lineaire regressieanalyse.
In vivo
Bij wildtype mannelijke C57BL/6-muizen remt LRRK2-IN-1 (100 mg/kg, i.p.) de Ser910- en Ser935-defosforylering van LRRK2 in de nier, terwijl er geen effecten in de hersenen zijn.
Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24885928/

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

Gelieve uw naam in te voeren.
Gelieve uw e-mailadres in te voeren. Voer een geldig e-mailadres in.
Schrijf alstublieft iets voor ons.