AM1241 Cannabinoid Receptor agoniste

AM-1241 est un agoniste protéen du CB2 basé sur les différents effets observés dans divers essais (afflux de calcium, phosphorylation de la kinase régulée par le signal extracellulaire (ERK) et mesure du cAMP) et sur le passage de l'antagonisme neutre à l'agonisme dans l'essai cAMP lorsque la concentration de forskoline est abaissée. Dans les essais de liaison par compétition [³H]CP 55,940, ce composé présente une forte affinité pour le récepteur CB2 humain avec une valeur K_i d'environ 7 nM, tandis que son affinité pour le récepteur CB1 humain est plus de 80 fois plus faible, en utilisant des préparations membranaires de lignées cellulaires HEK et CHO stables exprimant respectivement les récepteurs CB2 et CB1 humains recombinants. [2]

Tests de liaison

La liaison aux récepteurs cannabinoïdes est testée en utilisant la liaison par compétition-équilibre vs [³H]CP55,940. AM-1241 est dilué dans 25 mM Tris base (pH 7,4)/5 mM MgCl₂/1 mM EDTA/0,1% BSA essentiellement sans acide gras et transféré dans des plaques à 96 puits traitées au Regisil. [³H]CP55,940 (DuPont_NEN ; activité spécifique 100–180 Ci/mmol ; 1 Ci =37 GBq) est ajouté à une concentration de 0,8 nM. Des membranes préparées à partir de cerveau de rat (contenant des récepteurs CB1) ou de rate de souris (contenant des récepteurs CB2) sont ajoutées (≈50 μg de protéines membranaires par puits), les plaques sont incubées à 30 °C pendant 1 heure, et le contenu est filtré sur des filtres Packard Unifilter GF/B à 96 puits à l'aide d'un moissonneur de cellules Packard Filtermate 196. Les filtres sont lavés avec 50 mM Tris base/5 mM MgCl₂/0,5% BSA glacés et séchés. La radioactivité liée est quantifiée et corrigée pour la liaison non spécifique, et les résultats sont normalisés entre 0% et 100% de [³H]CP-55,940 spécifiquement lié. L'IC50 est déterminée par analyse de régression non linéaire à l'aide de GraphPad PRISM et transformée en valeur Ki. Toutes les données sont recueillies en double. Les valeurs IC50 et Ki sont déterminées à partir de trois expériences indépendantes.

AM-1241 inverse de manière dose-dépendante l'hypersensibilité tactile et thermique produite par la ligature des nerfs spinaux L5 et L6 chez les rats. Ce composé est également actif pour bloquer l'hypersensibilité tactile et thermique induite par la ligature des nerfs spinaux chez les souris dépourvues de récepteurs CB1 (souris CB1-/ -), confirmant qu'il inverse l'hypersensibilité sensorielle indépendamment des actions sur les récepteurs CB1.[1] Cette substance chimique (100, 330 μg/kg i.p.) supprime le développement de l'hyperalgésie et de l'allodynie thermiques et mécaniques évoquées par la carragénine. Et cette suppression est bloquée par l'antagoniste CB2 SR144528 mais pas par l'antagoniste CB1 SR141716A. [3] Il produit une antinociception dose-dépendante à un stimulus thermique appliqué à la patte arrière, lorsqu'il est administré dans la patte arrière du côté du test (patte ipsilatérale), tandis qu'il est beaucoup moins actif dans le côté contralatéral. L'A50 (dose analgésique produisant un effet de 50%) de ce composé est de 847 μg/kg, l'effet maximal possible (100% MPE) étant atteint à 3,3 mg/kg. Il produit également une antinociception dose-dépendante lorsqu'il est administré par voie intrapéritonéale (i.p.), avec un A50 de 103 μg/kg. Les actions antinociceptives de cette substance chimique sont bloquées par l'antagoniste sélectif des récepteurs CB2 AM630, mais pas par l'antagoniste sélectif des récepteurs CB1 AM251. Ce composé ne produit pas les effets cannabinoïdes du SNC d'hypothermie, de catalepsie, d'inhibition de l'activité ou d'altération de la déambulation, tandis que cette tétrade d'effets est produite par l'agoniste mixte des récepteurs CB1/CB2 WIN55,212-2.[4] Des injections quotidiennes de cette substance chimique par voie i.p., initiées au début des symptômes, augmentent l'intervalle de survie après l'apparition de la sclérose latérale amyotrophique (SLA) de 56% dans un modèle de souris transgénique de la SLA. [5]