Vedolizumab (anti-α4β7-integrin)

Vedolizumab (anti-α4β7-integrin) bindet an eine Untergruppe menschlicher peripherer Blut-Gedächtnis-CD4⁺-T-Lymphozyten, einschließlich Darm-homing-Interleukin-17-T-Helfer-Lymphozyten, am höchsten, bindet auch an Eosinophile auf hohem Niveau und an naive T-Helfer-Lymphozyten, naive und zytotoxische Gedächtnis-T-Lymphozyten, B-Lymphozyten, natürliche Killerzellen und Basophile auf niedrigerem Niveau; Vedolizumab bindet an Gedächtnis-CD4⁺-T- und B-Lymphozyten mit subnanomolarer Potenz mit einer EC50 von 0,3-0,4 nM.[1]

PBMCs wurden in Assay-Puffer für die intrazelluläre Färbung von CD4-Gedächtniszellen-Interleukin (IL) 17A resuspendiert. PBMCs wurden (oder nicht stimuliert, für die Kontrollproben) mit 50 ng/ml Phorbol-12-myristat-13-acetat und 1 µg/ml Ionomycin in Gegenwart von 3 µM Monensin für 5 h bei 37°C stimuliert. Nach dem Waschen wurden die Zellen mit fluoreszierend markierten Antikörpern gefärbt: Vedolizumab, Anti-α4 und Anti-β7, Anti-CD4 und Anti-CD45RO, wo zutreffend, bei 4°C für 30 min. Die Zellen wurden dann mit kaltem PBS gewaschen und in Fixier- und Permeabilisierungslösung-Färbepuffer bei 4°C für 30 min resuspendiert. Nach Fixierung und Permeabilisierung wurden die Zellen mit Permeabilisierungspuffer gewaschen und mit 10% normalem Rattenserum bei 4°C für 10 min blockiert. Nach dem Blockierungsschritt wurden die Zellen mit einem Fluorochrom-konjugierten Anti_x0002_IL17A-Antikörper bei 4°C für 30 min gefärbt. Schließlich wurden die Zellen mit Permeabilisierungspuffer gewaschen und analysiert.