Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilized powder

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Beschreibung

Poly DYKDDDDK Tag Peptid lyophilisiertes Pulver (3X DYKDDDDK Tag Peptid) ist ein Polypeptid, das aus 23 Aminosäuren mit einem Molekulargewicht von 2864 Da besteht und Anti-DYKDDDDK Tag Antikörper durch Kompetition binden kann, sodass der an Anti-DYKDDDDK Tag Antikörper gebundene Antikörper während der Immunpräzipitation des DYKDDDDK Tag Fusionsproteins eluiert werden kann. Das Motiv Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp im Polypeptid wiederholt sich dreimal, und die 8 Aminosäuren am Kohlenstoff-Terminus bilden den klassischen DYKDDDDK Tag (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).

Eigenschaften

Anwendung

Zur kompetitiven Elution von DYKDDDDK Fusionsproteinen vom monoklonalen Anti-DYKDDDDK Tag Antikörper in Lösung oder an Agarose gebunden auf den Anti-DYKDDDDK Beads.

Achtung

1. Lesen Sie das Benutzerhandbuch vor dem ersten Gebrauch sorgfältig durch;

2. Vermeiden Sie das Einfrieren, Trocknen und Hochgeschwindigkeitszentrifugieren während der Verwendung und Lagerung der Beads;

3. Dieses Produkt ist nur für Forschungs- und Entwicklungszwecke bestimmt, nicht für Medikamente, Haushalt oder andere Verwendungen. Bitte beachten Sie das Sicherheitsdatenblatt für Informationen zu Gefahren und sicheren Handhabungspraktiken.

Verfahren

Peptidelution von DYKDDDDK Fusionsprotein aus Anti-DYKDDDDK Beads

1. Suspendieren Sie das Anti-DYKDDDDK Tag Affinitätsgel im Fläschchen gründlich, um eine gleichmäßige Suspension des Harzes zu erhalten. Übertragen Sie schnell 10 μl der Gelsuspension (etwa 5 μl gepacktes Gelvolumen) in ein neues Röhrchen.

2. Fügen Sie 0,6 ml TBS hinzu. Suspendieren Sie das Anti-DYKDDDDK Tag Affinitätsgel gründlich durch Pipettieren. Zentrifugieren Sie das Harz 30 Sekunden lang bei 5000 U/min und entfernen Sie vorsichtig den Überstand. Stellen Sie sicher, dass der gesamte Waschpuffer entfernt wird, ohne das Harz zu verwerfen. Wiederholen Sie dies 3-4 Mal.

3. Geben Sie 500 μL zelluläre periplasmatische Extrakte zu dem gewaschenen Harz.

4. Proben 2 Stunden lang bei 4 °C vorsichtig schütteln.

5. Zentrifugieren Sie das Harz 30 Sekunden lang bei 5000 U/min. Übertragen Sie die Überstände in ein neues Röhrchen.

6. Waschen Sie das Harz mit 0,5 ml TBS, bis die OD280 des Überstands <0,05 beträgt.

7. Elution von DYKDDDDK Fusionsprotein durch Kompetition mit Poly DYKDDDDK Peptid. Eluieren Sie das gebundene DYKDDDDK Fusionsprotein durch kompetitive Elution mit fünf Aliquoten von einem Säulenvolumen einer Lösung, die 200–400 ug/mL Poly DYKDDDDK Peptid in TBS enthält.

8. Recycling der Anti-DYKDDDDK Beads
Poly DYKDDDDK Peptid kann möglicherweise nicht das gesamte an Anti-DYKDDDDK Beads gebundene DYKDDDDK Fusionsprotein eluieren. Es wird empfohlen, die Anti-DYKDDDDK Beads sofort nach Gebrauch durch Waschen mit drei 5-ml-Aliquoten von 0,1 M Glycin-HCl, pH 3,5, zu regenerieren. Das Gel sollte sofort in TBS reäquilibriert werden, bis der Effluent einen neutralen pH-Wert aufweist.

Hinweis: Lassen Sie die Anti-DYKDDDDK Beads nicht länger als 20 Minuten in Glycin-HCl.
9. Lagerung der Anti-DYKDDDDK Beads Waschen Sie die Anti-DYKDDDDK Beads dreimal mit 5 ml 50%igem Glycerin mit 10 mM Natriumphosphat, 150 mM Natriumchlorid, pH 7,4, enthaltend 0,02% (w/v) Natriumazid. Fügen Sie dann weitere 5 ml 50%iges Glycerin mit 10 mM Natriumphosphat, 150 mM Natriumchlorid, pH 7,4, enthaltend 0,02% (w/v) Natriumazid hinzu und lagern Sie es bei -20°C ohne Ablassen.

Lagerung (ab dem Datum des Erhalts)

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