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LRRK2-IN-1 LRRK2 Inhibitor

Kat.-Nr.S7584

LRRK2-IN-1 ist ein potenter und selektiver LRRK2-Inhibitor mit einem IC50 von 6 nM bzw. 13 nM für LRRK2 (G2019S) und LRRK2 (WT).
LRRK2-IN-1 LRRK2 Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 570.69

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Qualitätskontrolle

Charge: S758401 DMSO]100 mg/mL]false]Ethanol]100 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Reinheit: 99.61%
  • In Nature Medicine für seine erstklassige Qualität zitiert
  • COA
  • NMR
  • SDS
  • Datenblatt
99.61

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
HEK293 cells Function assay Inhibition of LRRK2 G2019S mutant expressed in HEK293 cells using nictide and ATP as substrate, IC50=0.006 μM
HEK293 cells Function assay 0.03-3 μM 90 mins Inhibition of wild-type LRRK2 phosphorylation at Ser935 expressed in HEK293 cells at 0.03 to 3 uM after 90 mins by immunoblot analysis
lymphoblastoid cells Function assay 0.03 to 3 uM 90 mins Inhibition of LRRK2 in human lymphoblastoid cells assessed as inhibition of Ser910 autophosphorylation at 0.03 to 3 uM after 90 mins by immunoblot method
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 570.69 Formel

C31H38N8O3

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 1234480-84-2 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles CN1CCN(CC1)C2CCN(CC2)C(=O)C3=CC(=C(C=C3)NC4=NC=C5C(=N4)N(C6=CC=CC=C6C(=O)N5C)C)OC

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 100 mg/mL (175.22 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
LRRK2 (G2019S)
(Cell-free assay)
6 nM
LRRK2 (WT)
(Cell-free assay)
13 nM
DCLK2
(Cell-free assay)
45 nM
In vitro
In HEK-293-Zellen, die stabil GFP-LRRK2[G2019S] exprimieren, verändert LRRK2-IN-1 die zytoplasmatische Lokalisation von LRRK2. In menschlichen Neuroblastom-SHSY5Y-Zellen und Maus-Swiss-3T3-Zellen induziert diese Verbindung eine ähnliche dosisabhängige Ser910- und Ser935-Dephosphorylierung und den Verlust der 14-3-3-Bindung an endogenes LRRK2. In transgenen C. elegans, die menschliches R1441C- und G2019S-LRRK2 exprimieren, wird das Verhaltensdefizit, das für dopaminerge Beeinträchtigungen charakteristisch ist, behoben. In Mausfibroblasten reduziert diese Chemikalie die Zellmotilität. In den Zelllinien AsPC-1 und HCT116 zeigt sie antiproliferative und pro-apoptotische Eigenschaften, induziert einen G1- und G2/M-Zellzyklusarrest und hemmt die DCLK1-mRNA- und Proteinexpression.
Kinase-Assay
IC50-Bestimmung
Aktives GST-LRRK2 (1326-2527), GST-LRRK2 [G2019S] (1326-2527), GST-LRRK2 [A2016T] (1326-2527) und GST-LRRK2 [A2016T+G2019S] (1326-2527) Enzym wird mit Glutathion-Sepharose aus HEK293-Zelllysat 36 h nach transienter Transfektion der entsprechenden cDNA-Konstrukte gereinigt. Peptidkinase-Assays, die in Duplikaten durchgeführt werden, werden in einem Gesamtvolumen von 40 µL angesetzt, das 0,5 µg dieser Verbindung (die bei etwa 10 % Reinheit eine Endkonzentration von 8 nM ergibt) in 50 mM Tris/HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 20 µM Nictide, 0,1 µM [γ-32P]ATP (~500 cpm/pmol) und die angegebenen Konzentrationen des in DMSO gelösten Inhibitors enthält. Nach Inkubation für 15 min bei 30 °C werden die Reaktionen durch Auftropfen von 35 µL der Reaktionsmischung auf P81-Phosphozellulosepapier und Eintauchen in 50 mM Phosphorsäure beendet. Die Proben werden ausgiebig gewaschen und der Einbau von [γ-32P]ATP in Nictide wird durch Cerenkov-Zählung quantifiziert. IC50-Werte werden mit GraphPad Prism mittels nicht-linearer Regressionsanalyse berechnet.
In vivo
Bei männlichen C57BL/6-Mäusen vom Wildtyp hemmt LRRK2-IN-1 (100 mg/kg, i.p.) die Ser910- und Ser935-Dephosphorylierung von LRRK2 in der Niere, während im Gehirn keine Effekte beobachtet werden.
Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24885928/

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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