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Avasimibe P450 (e.g. CYP17) Inhibitor

Kat.-Nr.S2187

Avasimibe hemmt ACAT mit einer IC50 von 3,3 μM und auch die humanen P450-Isoenzyme CYP2C9, CYP1A2 und CYP2C19 mit einer IC50 von 2,9 μM, 13,9 μM bzw. 26,5 μM.
Avasimibe P450 (e.g. CYP17) Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 501.72

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.95%
99.95

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
THP1 cells Function assay Inhibition of ACAT-mediated esterified cholesterol accumulation in human THP1 cells exposed to acetyl-LDL during differentiation assessed as effect on foam cell formation, IC50=1.5 μM 18620381
HepG2 cells Function assay Inhibition of ACAT in human HepG2 cells, IC50=0.479 μM 19167888
rat macrophages Function assay 24 h Inhibition of ACAT in rat macrophages assessed as incorporation of extracellular [3H]-oleic acid-BSA complex into the intracellular cholesteryl ester after 24 hrs, IC50=0.479 μM 19464189
SJ-GBM2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells 29435139
BT-37 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells 29435139
Saos-2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells 29435139
NB1643 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells 29435139
OHS-50 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells 29435139
IC21 Function assay Inhibition of ACAT1 in mouse IC21 cells in absence of BSA, IC50=0.06μM 29945757
J774 Function assay 18 hrs Inhibition of ACAT1 in mouse J774 cells assessed as reduction in esterified cholesterol accumulation after 18 hrs in presence of 25-hydroxycholesterol, IC50=0.59μM 29945757
IC21 Function assay Inhibition of ACAT1 in mouse IC21 cells in presence of BSA, IC50=0.76μM 29945757
Caco-2 Function assay 48 hrs Determination of IC50 values for inhibition of SARS-CoV-2 induced cytotoxicity of Caco-2 cells after 48 hours by high content imaging, IC50=3.93μM ChEMBL
Caco-2 Toxicity assay 48 hrs Toxicity against Caco-2 cells determined at 48 hours by intracellular ATP concentration using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay, CC50=13.71μM ChEMBL
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 501.72 Formel

C29H43NO4S

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 166518-60-1 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme CI-1011, PD-148515 Smiles CC(C)C1=C(C(=CC=C1)C(C)C)OS(=O)(=O)NC(=O)CC2=C(C=C(C=C2C(C)C)C(C)C)C(C)C

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 100 mg/mL (199.31 mM) Mit 50°C Wasserbad erwärmt; Ultraschallbehandelt;
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 16 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
CYP2C9
(Human Hepatic Microsomes)
2.9 μM
ACAT
(IC-21 macrophages)
3.3 μM
CYP1A2
(Human Hepatic Microsomes)
13.9 μM
CYP2C19
(Human Hepatic Microsomes)
26.5 μM
In vitro

Avasimibe in einer Konzentration von 1 μg/mL führt zu einer Reduktion des Gesamtcholesterins (TC) und des veresterten Cholesterins (EC) durch Hemmung der LDL-Bindung und Verringerung der Anzahl von Scavenger-Rezeptoren während der Schaumzellbildung in menschlichen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen (HMMs). Diese Verbindung in einer Konzentration von 2 μg/mL erhöht den Cholesterinflux aus etablierten HMM-Schaumzellen, die mit 10 μg/ml LDL vorinkubiert wurden. Es hemmt die Lipoprotein(a)-Akkumulation in den Kulturmedien primärer Affenhepatozyten dosisabhängig mit 11,9 % -31,3 % Hemmung, wobei die Veränderung hauptsächlich mit einem verringerten ApoA assoziiert ist. Diese Chemikalie, die in Konzentrationen von 10 nM, 1 μM und 10 μM für 24 Stunden in HepG2-Zellen inkubiert wird, reduziert die ApoB-Sekretion in die Medien um 25 %, 27 % bzw. 43 %. Es verringert die ApoB-Sekretion durch eine verbesserte intrazelluläre Degradation von ApoB anstatt einer verringerten Synthese von ApoB. Die Verbindung hemmt ACTC mit einer IC50 von 3,3 μM in IC-21 Makrophagen unter Berücksichtigung der Gesamtinhibitor-Konzentration in der Assay-Probe. Es hemmt die humanen P450-Isoenzyme CYP2C9, CYP1A2 und CYP2C19 mit IC50 von 2,9 μM, 13,9 μM bzw. 26,5 μM. Dieser Inhibitor hemmt die ACAT-1-Expression und die Cholesterinester-Synthese in Gliomzelllinien. Er hemmt das Wachstum der Gliomzellen, indem er den Zellzyklusarrest und die Apoptose aufgrund der Caspase-8- und Caspase-3-Aktivierung induziert.

Kinase-Assay
P450 Hemmstudien
Gepoolte menschliche Lebermikrosomen (HLM) von mindestens 15 Spendern werden für alle Hemmtests verwendet. Für die IC50-Bestimmungen werden die Substratsonden bei ihren ungefähren In-vitro-Km-Werten verwendet. Alle Inkubationen werden mit 100 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 7,4) und 1 mM NADPH durchgeführt. Für die CYP1A2-Hemmstudie werden Inkubationen in einem Gesamtvolumen von 0,5 ml, in Duplikaten mit 0,1 mg/ml HLM, 30 μM Phenacetin, 1 mM NADPH und in Anwesenheit dieser Verbindung (0, 0,3, 0,75, 1,5, 3, 7,5, 15, 30 und 40 μM in 50 mM) in einem Kaliumphosphatpuffer bei pH 7,4 durchgeführt. Nach einer Vorinkubation bei 37 °C für 7 min wird NADPH hinzugefügt, um die Enzymreaktion zu initiieren. Das Reaktionsgemisch wird nach 25 min mit 500 μl eisgekühltem 100 ng/ml Paracetamol-D4/CH3CN abgeschreckt. Die Standards (4-Acetamidophenol, Singulett) und Qualitätskontrollen (Triplikate für niedrig, mittel und hoch) werden bei Raumtemperatur hergestellt. Nach dem Mischen werden 0,2 ml der Proben auf eine andere Platte übertragen und nach Zentrifugation bei 3000 U/min für 10 min zur LC/MS/MS-Analyse eingereicht. Eine Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2,1 mm (5-μm Partikelgröße) Säule (Supelco, Bellefonte, PA) wird verwendet. Die mobile Phase ist isokratisch, 40:60 [Acetonitril/Ameisensäure, 0,1 % (v/v)] bei 0,2 ml/min.
In vivo

Avasimibe reduziert signifikant die Lipoprotein(a)- und Gesamtcholesterinspiegel bei neun gesunden männlichen Affen mit einer normalen Futterdiät, die drei Wochen lang oral mit CI-1011 in einer Dosis von 30 mg/kg pro Tag behandelt wurden. Die Lipoprotein(a)- und Gesamtcholesterinspiegel reduzieren sich auf 68 % bzw. 73 % der Kontrollwerte. Diese Verbindung senkt das Gesamtcholesterin hauptsächlich aufgrund einer Reduktion des Low-Density-Lipoproteins (LDL). Sie verringert die Amyloidplaquebelastung in Kortex und Hippocampus und reduziert die Spiegel von unlöslichem Abeta40 und Abeta42 sowie C-terminalen Fragmenten des Amyloid-Vorläuferproteins (APP) in Gehirnextrakten bei jungen humanen APP-transgenen Mäusen. Diese Chemikalie reduziert diffuse Amyloidplaques durch Unterdrückung der Astrogliose und verstärkte mikrogliale Aktivierung bei gealterten humanen APP-transgenen Mäusen.

Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11882316/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15333513/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20404512/
  • [7] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20613640/
  • [8] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12223223/

Anwendungen

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot p-AKT / AKT Active β-catenin
S2187-WB1
29489864
Immunofluorescence β-catenin
S2187-IF1
29545473

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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Häufig gestellte Fragen

Frage 1:
I'd like to have more information about the in vivo administration of it in monkeys?

Antwort:
It can be dissolved in 2% DMSO+corn oil at 5mg/ml clearly, and in 0.5% CMC Na+1% Tween 80 at 10mg/ml as a suspension.

Frage 2:
We want to use it for mice study by IP injection. I was wondering if you have any suggestions how to make a soluble solution for IP injection?

Antwort:
S2187 can be dissolved in 5% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O at 1 mg/ml as a clear solution. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first, then add PEG and Tween. After they mixed well, then dilute with water. And we found after stayed for about 20min, the precipitation will go out. So please prepare the solution just before use.