Opaganib (ABC294640) SPHK Inhibitor

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.73%

99.73

Verwandte Ziele	PD-1/PD-L1 CXCR STING AhR Immunology & Inflammation related CD markers Interleukins Anti-infection Antioxidant COX
Weitere SPHK Inhibitoren	PF-543 hydrochloride SKI II K6PC-5 Defensamide (MHP) SKI-V SKI-178

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien	Assay-Typ	Inkubationszeit	Aktivitätsbeschreibung	PMID
Sf9	Function assay		Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM	25643074
Sf9	Function assay	2 hrs	Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM	30889352
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht	380.91	Formel	C₂₃H₂₅ClN₂O	Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)	3 Jahre-20°CPulver
CAS-Nr.	915385-81-8	SDF herunterladen		Lagerung von Stammlösungen	1 Jahr-80°Cin Lösungsmittel 1 Monat-20°Cin Lösungsmittel
Synonyme	N/A			Smiles	C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 40 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse	Konzentration	Volumen	Molekulargewicht
=	×	×

Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo Charge:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Von Selleck Labs validiert. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, kontaktieren Sie unser Verkaufsteam für kundenspezifische Tests.	24.000mg/ml (63.01mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

Dosierung: mg/kg Durchschnittsgewicht der Tiere: g Dosiervolumen pro Tier:μL Anzahl der Tiere:

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH₂O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC₅₀/Ki	SphK2 (Cell-free assay) 60 μM
In vitro	Opaganib (ABC294640) verändert das Verhältnis von Ceramid/S1P deutlich, was mit einer Hemmung der SK-Aktivität in MDA-MB-231-Zellen übereinstimmt. Es hemmt die Proliferation von Tumorzellen mit IC50-Werten im Bereich von ungefähr 6 bis 48 μM und beeinträchtigt die Migration von Tumorzellen einhergehend mit dem Verlust von Mikrofilamenten. Diese Verbindung induziert nicht-apoptotischen Zelltod, morphologische Veränderungen in Lysosomen, die Bildung von Autophagosomen und eine Zunahme saurer Vesikel in A-498-, PC-3- und MDA-MB-231-Zellen. Sowohl in MCF-7- als auch in ER-transfizierten HEK293-Zellen verringert es die E2-stimulierte ERE-Luciferase-Aktivität.
Kinase-Assay	Sphingosinkinase-Assays
Kinase-Assay	Die IC50-Werte für Opaganib (ABC294640) und DMS werden mittels eines neu entwickelten HPLC-basierten SK-Aktivitätstests bestimmt. Kurz gesagt, werden die Testverbindungen mit rekombinantem SK1 oder SK2 und NBD-Sph in den isozymselektiven Assaypuffern inkubiert, die unten detailliert sind, mit 1 mg/ml fettsäurefreiem Rinderserumalbumin, 100 μM ATP und 400 μM MgCl₂. Das Produkt, d.h. NBD-S1P, wird von NBD-Sph mittels HPLC wie folgt getrennt: Waters 2795 HPLC-System mit einem Waters 2495 Fluoreszenzdetektor, C8 Chromolith RP-8e Säule (100 × 4,6 mm), 1 ml/min mobile Phase (Acetonitril/20 mM Natriumphosphatpuffer, pH 2,5, bei 45:55). Die Fluoreszenz wird bei einer Anregung von 465 nm und einer Emission von 531 nm überwacht. Das Verhältnis von NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) wird als Maß für die SK-Aktivität verwendet. Die SK-Isozym-selektiven Assaypuffer enthielten jeweils 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-Mercaptoethanol, 5% Glycerin, 1× Proteaseinhibitoren und 1× Phosphataseinhibitoren. Für den SK1-Assaypuffer wird 0,25% (final) Triton X-100 hinzugefügt; und für den SK2-Puffer wird 1 M (final) KCl hinzugefügt. Die Assays werden 2 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt, und dann wird ein 1,5-faches Volumen Methanol hinzugefügt, um die Kinase-Reaktion zu beenden. Nach 10 Minuten werden die Proben bei 20.000 g zentrifugiert, um das präzipitierte Protein abzuscheiden, und die Überstände werden mittels HPLC analysiert. In Experimenten zur Bestimmung des Ki für die Hemmung von SK2 durch diese Verbindung wird das ADP Quest Assay-System verwendet, um die Kinase-Aktivität in Gegenwart variierender Konzentrationen von Sphingosin und ihr zu messen. Um die Auswirkungen von Opaganib auf die zelluläre SK-Aktivität zu bestimmen, werden nahezu konfluente MDA-MB-231-Zellen über Nacht serumgehungert und dann mit variierenden Konzentrationen von ihm behandelt. Die Zellen werden dann mit [³H]Sphingosin in einer Endkonzentration von 1 μM inkubiert. Die Zellen nehmen das exogene Sphingosin auf, das über die SK-Aktivität in S1P umgewandelt wird, und [³H]S1P wird durch Extraktion von [³H]Sphingosin getrennt und durch Szintillationszählung quantifiziert.
In vivo	Opaganib (ABC294640) reduziert das Tumorwachstum bei Mäusen mit Brustadenokarzinom-Xenotransplantaten signifikant, was mit einer Depletion der S1P-Spiegel verbunden ist. Bei SCID-Mäusen (severe combined immunodeficient mice) mit A-498-Xenotransplantaten verzögert es das Tumorwachstum und erhöht Autophagie-Marker. Diese Verbindung schützt auch vor lebertransplantationsinduzierter Entzündung und dem Zusammenspiel zwischen angeborener und adaptiver Immunität, wichtigen Ereignissen, die die Transplantatverletzung auslösen und verschlimmern, und verbessert die Leberfunktion und das Überleben.
Literatur	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Anwendungen

Methoden	Biomarker	Bilder	PMID
Western blot	c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3		27517489
Growth inhibition assay	Cell proliferation		25122609

Klinische Studieninformationen

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2024-05-22)

NCT-Nummer	Rekrutierung	Erkrankungen	Sponsor/Kooperationspartner	Startdatum	Phasen
NCT02939807	Withdrawn	Carcinoma Hepatocellular	Medical University of South Carolina\|National Cancer Institute (NCI)\|Apogee Biotechnology Corporation	September 30 2019	Phase 2
NCT03377179	Completed	Cholangiocarcinoma\|Cholangiocarcinoma Non-resectable\|Cholangiocarcinoma Perihilar\|Cholangiocarcinoma Extrahepatic\|Cholangiocarcinoma Intrahepatic	RedHill Biopharma Limited	March 7 2018	Phase 2
NCT02757326	Terminated	Multiple Myeloma	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Duke University\|National Cancer Institute (NCI)	December 13 2016	Phase 1\|Phase 2
NCT02229981	Withdrawn	Diffuse Large B Cell Lymphoma\|Kaposi Sarcoma	RedHill Biopharma Limited\|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans\|Apogee Biotechnology Corporation	July 2014	Phase 1\|Phase 2
NCT01488513	Completed	Pancreatic Cancer\|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Medical University of South Carolina\|FDA Office of Orphan Products Development\|National Cancer Institute (NCI)	August 2011	Phase 1

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Wenn Sie weitere Fragen haben, hinterlassen Sie bitte eine Nachricht.

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C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
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C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 380.91

Qualitätskontrolle

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Löslichkeit

Molaritätsrechner

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Wirkmechanismus

Anwendungen

Klinische Studieninformationen

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