AM1241 Cannabinoid Receptor Agonist

AM-1241 ist ein proteaner Agonist von CB2, basierend auf den unterschiedlichen Effekten, die in verschiedenen Assays beobachtet wurden (Kalziumeinstrom, extrazelluläre signalregulierte Kinase (ERK)-Phosphorylierung und cAMP-Messung), und auf dem Wechsel von neutralem Antagonismus zu Agonismus im cAMP-Assay, wenn die Forskolin-Konzentration gesenkt wird. In [³H]CP 55.940-Kompetitionsbindungsassays zeigt diese Verbindung eine hohe Affinität zum humanen CB2-Rezeptor mit einem K_i-Wert von etwa 7 nM, während ihre Affinität zum humanen CB1-Rezeptor mehr als 80-fach schwächer ist, unter Verwendung von Membranpräparationen aus stabilen HEK- und CHO-Zelllinien, die rekombinante humane CB2- bzw. CB1-Rezeptoren exprimieren. [2]

Bindungstests

Die Bindung an Cannabinoid-Rezeptoren wird mittels Kompetitions-Gleichgewichtsbindung gegen [³H]CP55,940 getestet. AM-1241 wird in 25 mM Tris-Base (pH 7,4)/5 mM MgCl₂/1 mM EDTA/0,1% im Wesentlichen fettsäurefreies BSA verdünnt und auf mit Regisil behandelte 96-Well-Platten überführt. [³H]CP55,940 (DuPont_NEN; spezifische Aktivität 100–180 Ci/mmol; 1 Ci = 37 GBq) wird bis zu einer Konzentration von 0,8 nM hinzugefügt. Membranen, die aus Rattenhirn (enthält CB1-Rezeptoren) oder Mausmilz (enthält CB2-Rezeptoren) präpariert wurden, werden hinzugefügt (ca. 50 μg Membranprotein pro Well), die Platten werden 1 Stunde bei 30 °C inkubiert, und der Inhalt wird über Packard Unifilter GF/B 96-Well-Filter unter Verwendung eines Packard Filtermate 196 Zellernteers filtriert. Die Filter werden mit eiskalter 50 mM Tris-Base/5 mM MgCl₂/0,5% BSA gewaschen und getrocknet. Die gebundene Radioaktivität wird quantifiziert und für die unspezifische Bindung korrigiert, und die Ergebnisse werden zwischen 0% und 100% spezifisch gebundenem [³H]CP-55,940 normalisiert. Der IC50-Wert wird durch nichtlineare Regressionsanalyse mittels GraphPad PRISM bestimmt und in einen Ki-Wert umgewandelt. Alle Daten werden doppelt erhoben. IC50- und Ki-Werte werden aus drei unabhängigen Experimenten bestimmt.

AM-1241 kehrt dosisabhängig die taktile und thermische Hypersensibilität um, die durch die Ligatur der L5- und L6-Spinalnerven bei Ratten erzeugt wird. Diese Verbindung ist auch wirksam bei der Blockierung der spinalnervenligaturinduzierten taktilen und thermischen Hypersensibilität bei Mäusen ohne CB1-Rezeptoren (CB1-/- Mäuse), was bestätigt, dass sie die sensorische Hypersensibilität unabhängig von Aktionen an CB1-Rezeptoren umkehrt.[1] Diese Chemikalie (100, 330 μg/kg i.p.) unterdrückt die Entwicklung von Carrageenan-evozierter thermischer und mechanischer Hyperalgesie und Allodynie. Und diese Unterdrückung wird durch den CB2-Antagonisten SR144528 blockiert, nicht aber durch den CB1-Antagonisten SR141716A. [3] Sie erzeugt dosisabhängige Antinozizeption auf einen thermischen Reiz, der auf die Hinterpfote angewendet wird, wenn sie in die Hinterpfote auf der Testseite (ipsilateral i. Pfote) verabreicht wird, während sie in die kontralaterale Seite viel weniger aktiv ist. A50 (analgetische Dosis, die einen 50%igen Effekt ergibt) dieser Verbindung beträgt 847 μg/kg, wobei der maximal mögliche Effekt (100% MPE) bei 3,3 mg/kg erreicht wird. Sie erzeugt auch dosisabhängige Antinozizeption bei intraperitonealer Verabreichung (i.p.) mit einem A50 von 103 μg/kg. Die antinozizeptiven Wirkungen dieser Chemikalie werden durch den CB2-Rezeptor-selektiven Antagonisten AM630 blockiert, nicht aber durch den CB1-Rezeptor-selektiven Antagonisten AM251. Diese Verbindung erzeugt nicht die ZNS-Cannabinoid-Effekte von Hypothermie, Katalepsie, Hemmung der Aktivität oder beeinträchtigter Ambulation, während dieses Tetrad von Effekten durch den gemischten CB1/CB2-Rezeptor-Agonisten WIN55,212-2 erzeugt wird.[4] Tägliche Injektionen dieser Chemikalie über den i.p.-Weg, die bei Symptombeginn initiiert werden, erhöhen das Überlebensintervall nach dem Ausbruch der Amyotrophen Lateralsklerose (ALS) um 56% in einem transgenen Mausmodell der ALS. [5]