Apoptosis Activator 2 Caspase Aktivator

Apoptosis Activator 2 (20 μM) erhöht bei reduzierter Cyto-c-Konzentration den Apaf-1-Anteil im Apoptosom um das 1,5-fache auf 33 %. Diese Verbindung erhöht das Ausmaß der caspase-3-Aktivierung bei reduziertem Cyto-c-Spiegel und die caspase-3-Aktivierung um das 4-fache. Es induziert stark die caspase-3-Aktivierung, PARP-Spaltung und DNA-Fragmentierung und tötet schließlich Zellen mit einem IC50 von 4 μM ab. Dieser Aktivator induziert die Apoptosis von PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 und NCI-H23 mit einem IC50 von 50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM und 35 μM. Er übt eine zytostatische Wirkung auf die Mehrheit der getesteten Tumorzelllinien aus und hemmt das Zellwachstum bei 10 μM in 40 von 48 getesteten Zelllinien um 50-100 %. [1] Diese Chemikalie induziert den Zelltod durch Auslösen der Apoptosom-Bildung. Der Grad der En1-Expression hat keinen signifikanten Einfluss auf die Überlebensraten von ventralen Mittelhirnkulturen für diese Verbindung (-8,1 ± 6,0 %). Die Überlebensrate wird nicht signifikant verändert, wenn die anderen drei Reagenzien für diesen Aktivator verwendet werden (-10,7 ± 4,7 %). [2] Diese Verbindung (10 μM) induziert Apoptosis in AGS-Zellen, wie durch apoptotische DNA-Leiter und Tunel-Assay evaluiert. Sie (10 μM) verstärkt die Induktion von Apoptosis durch Anti-TROP2-konjugierte Liposomen. [3] Cyclohexamid (10 μg/mL) oder zVAD (50 μM) schützt signifikant vor der Toxizität dieser Chemikalie in neuronalen Kulturen. Dieser Aktivator (3 μM) führt zu zahlreichen Neuronen mit pyknotischen Kernen, die auf einen Zelltod durch Apoptosis hindeuten. DHT (10 nM) oder E2 (10 nM) schützt signifikant vor der Toxizität dieser Verbindung in neuronalen Kulturen. [4]

Zellfreier Apoptosis-Assay

Zytoplasmatische Extrakte von HeLa-Zellen werden nach zuvor veröffentlichten Berichten hergestellt. Apoptosis Activator 2 in DMSO werden in 96-Well-Mikrotiterplatten in einer Endkonzentration von 1 mM (endgültige DMSO-Konzentration beträgt 1 % Vol/Vol) verteilt. Zu jeder Vertiefung werden 250 μg Gesamtprotein aus zytoplasmatischen Extrakten in HEB-Puffer (50 mM Hepes, pH 7,4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl), mit 2 mM DTT, 2 μM Cyto c und 0,5 μM DEVD-AFC (Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin)-Substrat in einem Gesamtvolumen von 150 μL gegeben. Die Platten werden bei 37 ℃ inkubiert und die Fluoreszenz wird in einem LJL Biosystems Plattenlesegerät in 10-Minuten-Intervallen abgelesen.