Home Protein Tyrosine Kinase EGFR Inhibitor Dacomitinib (PF-299804)

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Dacomitinib (PF-299804) HER-Inhibitor

Kat.-Nr.: S2727

Dacomitinib ist ein potenter, irreversibler Pan-ErbB-Inhibitor, hauptsächlich für EGFR mit einem IC50 von 6 nM in einem zellfreien Assay. Dacomitinib hemmt ERBB2 und ERBB4 mit einem IC50 von 45,7 nM bzw. 73,7 nM. Dacomitinib ist wirksam gegen NSCLCs mit EGFR- oder ERBB2-Mutationen sowie gegen solche, die die EGFR T790M-Mutation aufweisen. Dacomitinib hemmt das Zellwachstum und induziert apoptosis. Phase 2.
Dacomitinib (PF-299804) EGFR Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 469.94

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.84%
99.84

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
PC9 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR exon 19 deletion activating mutant phosphorylation in human PC9 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.63 nM 23930994
human LoVo cells Function assay 2 h Inhibition of wild type EGFR phosphorylation in human LoVo cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.011 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR L858R/T970M double mutant phosphorylation in human NCI-H1975 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.042 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Proliferation assay Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells assessed as growth inhibition, GI50=0.1233 μM 26310890
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB1 (unknown origin) (Met-668 to Ala-1211 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.006 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 2 hrs Irreversible inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in EGF-stimulated mouse NIH/3T3 cells incubated for 2 hrs followed by stimulation with EGF for 10 mins, IC50 = 0.006 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB2 (unknown origin) (Ile-675 to Val-1256 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.046 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB4 (unknown origin) (Gly-259 to Gly-690 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.074 μM. 27491023
Sf9 Function assay 30 mins Irreversible inhibition of human recombinant GST-tagged JAK3 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in polyglutamic acid-tyrosine phosphorylation after 30 mins by ELISA, IC50 = 3.57 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 30 mg/kg 2 days In vivo inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in NIH/3T3 cells implanted in mouse at 30 mg/kg, po qd for 2 days measured 24 hrs post last dose by Western blot analysis 27491023
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human EGFR catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.006 μM. 28754471
NCI-H1819 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1819 cells expressing wild type HER2 incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.029 μM. 28754471
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human HER2 catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.0457 μM. 28754471
NCI-H1975 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells expressing EGFR T790M/L858R mutant incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.44 μM. 28754471
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 469.94 Formel

C24H25ClFN5O2

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 1110813-31-4 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme PF299804,PF299 Smiles COC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)NC(=O)C=CCN4CCCCC4

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 49 mg/mL (104.26 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 15 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
EGFR
(Cell-free assay)
6.0 nM
ErbB2
(Cell-free assay)
45.7 nM
ErbB4
(Cell-free assay)
73.7 nM
In vitro

PF299804 is a specific inhibitor of the ERBB family of kinases. This compound inhibits EGFR signaling and induces apoptosis in the EGFR T790M-containing H3255 GR cell line. It is effective in -sensitive and NSCLC cell lines. This chemical inhibits the growth of H3255 and HCC827 cells engineered to express EGFR T790M. It inhibits EGFR phosphorylation in the presence of the T790M mutation. This agent is believed to irreversibly inhibit ERBB tyrosine kinase activity through binding at the ATP site and covalent modification of nucleophilic cysteine residues in the catalytic domains of ERBB family members. It shows significant growth-inhibitory effects in HER2-amplified gastric cancer cells (SNU216, N87), and it has lower 50% inhibitory concentration values compared with other EGFR tyrosine kinase inhibitors, including BIBW-2992, and CI-1033. This inhibitor induces apoptosis and G1 arrest and inhibits phosphorylation of receptors in the HER family and downstream signaling pathways including STAT3, AKT, and extracellular signal-regulated kinases (ERK) in HER2-amplified gastric cancer cells. It also blocks EGFR/HER2, HER2/HER3, and HER3/HER4 heterodimer formation as well as the association of HER3 with p85α in SNU216 cells. A recent research uses forty-seven human breast cancer and immortalized breast epithelial lines to evaluate the inhibition effects of this compound, the results indicate it preferentially inhibits growth of HER-2-amplified breast cancer cell lines than nonamplified lines (RR = 3.39, p < 0.0001). This chemical reduces the phosphorylation of HER2, EGFR, HER4, AKT, and ERK in the majority of sensitive lines. It exerts its anti-proliferative effect through a combined G0/G1 arrest and an induction of apoptosis.

Kinase-Assay
ELISA-basierter ERBB-Kinase-Assay
Die zytoplasmatischen ERBB1-, ERBB 2- und ERBB4-Fusionsproteine werden durch Klonierung der ERBB1-Sequenz (Met-668 bis Ala-1211), der ERBB2-Sequenz (Ile-675 bis Val-1256) und der ERBB4-Sequenz (Gly-259 bis Gly-690) mittels PCR in den Baculovirus-Vektor pFastBac hergestellt. Die Proteine werden in mit Baculovirus infizierten Sf9-Insektenzellen als GST-Fusionsproteine exprimiert. Die Reinigung der Proteine erfolgt durch Affinitätschromatographie unter Verwendung von Glutathion-Sepharose-Beads. Die Hemmung der ERBB-Tyrosinkinase-Aktivität wird mittels eines ELISA-basierten Rezeptor-Tyrosinkinase-Assays bewertet. Kinase-Reaktionen (50 mM HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM Natriumorthovanadat, 2 mM Dithiothreitol, 20 μM ATP, diese Verbindung oder Vehikelkontrolle und 1-5 nM GST-erbB pro 50 μL Reaktionsgemisch) werden in 96-Well-Platten durchgeführt, die mit 0,25 mg/mL Poly-Glu-Tyr beschichtet sind. Die Reaktionen werden für 6 Minuten bei Raumtemperatur unter Schütteln inkubiert. Die Kinase-Reaktionen werden durch Entfernung des Reaktionsgemisches gestoppt, anschließend werden die Wells mit Waschpuffer (0,1 % Tween 20 in PBS) gewaschen. Phosphorylierte Tyrosinreste werden durch Zugabe von 0,2 μg/mL Antiphosphotyrosin-Antikörper (Oncogene Ab-4; 50 μL/Well), gekoppelt an Meerrettichperoxidase (HRP), verdünnt in PBS mit 3 % BSA und 0,05 % Tween 20 für 25 Minuten unter Schütteln bei Raumtemperatur detektiert. Der Antikörper wird entfernt und die Platten werden in Waschpuffer gewaschen. HRP-Substrat (SureBlue3,3,5,5-Tetramethylbenzidin oder TMB) wird zugegeben (50 μL pro Well) und für 10-20 Minuten unter Schütteln bei Raumtemperatur inkubiert. Die TMB-Reaktion wird durch Zugabe von 50 μL Stopplösung (0,09 N H2SO4) gestoppt. Das Signal wird durch Messung der Extinktion bei 450 nm quantifiziert. Die IC50-Werte für diese Verbindung werden unter Verwendung der Median-Effekt-Methode bestimmt.
In vivo

Orally administered PF299804 effectively inhibits growth of HCC827 Del/T790M xenografts. Low oral administration of this compound (15mg/kg) causes significant antitumor activity, including marked tumor regressions in a variety of human tumor xenograft models that express and/ or overexpress ERBB family members or contain the double mutation (L858R/T790M) in ERBB1 (EGFR).

Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22761403/

Anwendungen (Applications)

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot pEGFR / EGFR / pERK / ERK / pAKT / AKT / p-mTOR / mTOR / pSTAT3 / STAT3
S2727-WB1
24853121
Immunofluorescence LC3
S2727-IF1
28366635
Growth inhibition assay Cell viability
S2727-viability1
28363995

Klinische Studieninformationen (Clinical Trial Information)

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2024-05-22)

NCT-Nummer Rekrutierung Erkrankungen Sponsor/Kooperationspartner Startdatum Phasen
NCT06075615 Not yet recruiting
Carcinoma Non-Small-Cell Lung
Pfizer
 September 1 2024 --
NCT06321510 Not yet recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 April 1 2024 --
NCT04609319 Active not recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 January 23 2021 --
NCT03865446 Completed
Severe Hepatic Impairment
Pfizer
 April 5 2019 Phase 1
NCT02382796 Completed
NSCLC
Pfizer
 July 10 2015 Phase 2
NCT02268747 Unknown status
Skin Squamous Cell Cancer
Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Milano
 November 2014 Phase 2

Häufig gestellte Fragen (Frequently Asked Questions)

Frage 1:
I would like to know whether the in vivo formulation you recommend for it is suitable for oral administration?

Antwort:
S2727 in 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80 at 10mg/ml is a homogeneous suspension, and it was fine for oral gavage. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first. If it dissolves not readily, please sonicate and warm it at about 45-50℃ for a while to help dissolving. Then add PEG 300 and Tween 80. After they mixed well, dilute with water. Then it will become a homogeneous suspension.