Ripasudil hydrochloride dihydrate ROCK Inhibitor

In monkey trabecular meshwork (TM) cells, Ripasudil induces retraction and rounding of cell bodies as well as disruption of actin bundles. In Schlemm's canal endothelial (SCE) cells, Ripasudil significantly decreases transendothelial electrical resistance (TEER), increases the transendothelial flux of FITC-dextran, and disrupts cellular localization of ZO-1 expression. [3]

Kinase-Inhibitions-Assay

ROCK 1 (0,75 ng/μL) und ROCK 2 (0,5 ng/μL) werden mit verschiedenen Konzentrationen von K-115, Y-27632 oder HA-1077 bei 25 °C für 90 min in 50 mmol/L Tris-HCl-Puffer (pH 7,5) inkubiert, der 100 mmol/L KCl, 10 mmol/L MgCl₂, 0,1 mmol/L EGTA, 30 μmol/L Long S6 Kinase Substratpeptid und 1 μmol/L ATP in einem Gesamtvolumen von 40 μL enthält. PKACα, PKC und CaMKIIα werden ebenfalls mit verschiedenen Konzentrationen von K-115, Y-27632 oder HA-1077 inkubiert. PKACα (0,0625 ng/μL) wird bei 25 °C für 30 min in 40 mmol/L Tris-HCl-Puffer (pH 7,5) inkubiert, der 20 mmol/L MgCl₂, 1 mg/mL BSA, 5 μmol/L Kemptid-Peptidsubstrat und 1 μmol/L ATP in einem Gesamtvolumen von 40 μL enthält. PKC (0,025 ng/μL) wird bei 25 °C für 80 min in 20 mmol/L Tris-HCl-Puffer (pH 7,5) inkubiert, der 20 mmol/L MgCl₂, 0,4 mmol/L CaCl₂, 0,1 mg/mL BSA, 0,25 mmol/L EGTA, 25 ng/mL Phosphatidylserin, 2,5 ng/mL Diacylglycerin, 0,0075% Triton-X-100, 25 μmol/L DTT, 10 μmol/L Neurogranin (28–43) Peptidsubstrat und 1 μmol/L ATP in einem Gesamtvolumen von 40 μL enthält. CaMKIIα (0,025 ng/μL) wird bei 25 °C für 90 min in 50 mmol/L Tris-HCl-Puffer (pH 7,5) inkubiert, der 10 mmol/L MgCl₂, 2 mmol/L CaCl₂, 0,04 mg/mL BSA, 16 μg/mL gereinigtes Calmodulin aus Rinderhoden, 500 μmol/L DTT, 50 μmol/L Autocamitid 2 und 1 μmol/L ATP in einem Gesamtvolumen von 40 μL enthält. Nach der Inkubation werden 40 μL Kinase-Glo Luminescent Kinase Assay Lösung hinzugefügt und 10 min bei 25 °C belassen. Die relativen Lichteinheiten (RLU) werden mit einem Luminometer gemessen. Die RLU ohne Testverbindung wird als 100% (Kontrollwert) und die ohne Enzym und Verbindung als 0% (Normalwert) festgelegt. Die Reaktionsrate (% der Kontrolle) wird dann aus den RLU mit Zugabe jeder Konzentration der Testverbindungen berechnet, und die 50%igen Hemmkonzentrationen (IC50) werden durch logistische Regressionsanalyse mittels SAS bestimmt.

In albino rabbits and monkeys, topical instillation of Ripasudil significantly reduces intraocular pressure (IOP) with maximum IOP reduction of 8.55 mmHg and 4.36 mmHg at 0.5 % and 0.4%, respectively. [1]

Ripasudil (1 mg/kg daily, p.o.) exerts a neuroprotective effect on retinal ganglion cell (RGC) after optic nerve crush (NC) by suppressing oxidative stress through pathways involving the Nox family in a mouse model. [2]