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RO4929097 (RG-4733) γ-Secretase-Inhibitor

Kat.-Nr.S1575

RO4929097 (RG-4733) ist ein γ Secretase-Inhibitor mit einer IC50 von 4 nM in einem zellfreien Assay, der die zelluläre Verarbeitung von Aβ40 und Notch mit einer EC50 von 14 nM bzw. 5 nM hemmt. Phase 2.
RO4929097 (RG-4733) Secretase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 469.4

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.77%
99.77

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
U87 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
U87 R1 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
MGG4 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
MGG6 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
MGG8 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
MGG23 Cell Viability Assay 30 μM 4 d decreases cell viability 24495907
SUM149 Cell Viability Assay 0-10 μM 72 h inhibits cell growth dose dependently 22547109
Sum190 Cell Viability Assay 0-10 μM 72 h inhibits cell growth dose dependently 22547109
WM35 Function Assay 10 uM 24 h DMSO decreases the levels of NOTCH downstream target HES1 21980408
WM98.1 Function Assay 10 uM 24 h DMSO decreases the levels of NOTCH downstream target HES1 21980408
WM115 Function Assay 10 uM 24 h DMSO decreases the levels of NOTCH downstream target HES1 21980408
WM983A Function Assay 10 uM 24 h DMSO decreases the levels of NOTCH downstream target HES1 21980408
WM3248  Function Assay 10 uM 24 h DMSO decreases the levels of NOTCH downstream target HES1 21980408
WM35 Growth Inhibition Assay 10 uM 0-18 d DMSO inhibits cell growth time dependently 21980408
WM98.1 Growth Inhibition Assay 10 uM 0-18 d DMSO inhibits cell growth time dependently 21980408
WM115 Growth Inhibition Assay 10 uM 0-18 d DMSO inhibits cell growth time dependently 21980408
WM983A Growth Inhibition Assay 10 uM 0-18 d DMSO inhibits cell growth time dependently 21980408
WM3248  Growth Inhibition Assay 10 uM 0-18 d DMSO inhibits cell growth time dependently 21980408
A673 qHTS assay 29435139
DAOY qHTS assay 29435139
BT-37 qHTS assay 29435139
BT-12 qHTS assay 29435139
OHS-50 qHTS assay 29435139
SJ-GBM2 qHTS assay 29435139
SK-N-MC qHTS assay 29435139
NB-EBc1 qHTS assay 29435139
LAN-5 qHTS assay 29435139
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 469.4 Formel

C22H20F5N3O3

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 847925-91-1 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme RG-4733 Smiles CC(C)(C(=O)NCC(C(F)(F)F)(F)F)C(=O)NC1C2=CC=CC=C2C3=CC=CC=C3NC1=O

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 94 mg/mL (200.25 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 50 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
γ secretase
(Cell-free assay)
4 nM
Notch
(Cell-free assay)
5 nM
Aβ40
(Cell-free assay)
14 nM
In vitro
RO4929097 verringert die Menge der in das Kulturmedium sezernierten Aβ-Peptide in HEK293-Zellen mit einer EC50 von 14 nM. Diese Verbindung hemmt die Notch-Verarbeitung stark mit einer EC50 von 5 nM im Notch-zellbasierten Reporter-Assay. Die Potenz dieser Chemikalie in zellfreien und zellulären Assays liegt im niedrigen nanomolaren Bereich, wobei eine >100-fache Selektivität gegenüber 75 anderen Proteinen verschiedener Typen, einschließlich Rezeptoren, Ionenkanälen und Enzymen (CEREP-Panel), beobachtet wurde. Nach 5 Behandlungstagen reduziert es die Produktion von ICN in den menschlichen NSCLC A549-Zellen, was in der Gewebekultur einen abgeflachten und weniger transformierten Tumorzellphänotyp induziert. Es blockiert die Notch-Verarbeitung in menschlichen nicht-kleinzelligen Lungenkarzinomzellen und verringert die Expression des Notch-Transkriptionszielgens Hes1. Die Behandlung mit dieser Verbindung zeigt eine zwei- bis dreifache Abnahme der Expression direkter Notch-Zielgene, Hes1, Hey1 und Heyl in SUM149 und eine 3,5- bis achtfache Abnahme der Expression in SUM190-Zellen. Es hemmt das Wachstum von SUM149-Zellen in dosisabhängiger Weise geringfügig. Bei einer Konzentration von 1 μM dieser Chemikalie beträgt die Wachstumshemmung 20 % für SUM149 und 10 % für SUM190-Zellen, relativ zu vehikelbehandelten Kontrollen. Es verringert die Produktion entzündlicher Zytokine durch T-Zellen. Ferner verschiebt sich bei dieser Behandlung das Verhältnis zugunsten von TH2- gegenüber TH1-Zytokinen. Darüber hinaus würde die T-Zell-aktivierte IL-6-Produktion durch diese Verbindung erhöht. Nach dieser Behandlung zeigen die ausgewählten Melanomzelllinien eine Herunterregulierung des NOTCH-nachgeschalteten Effektors HES1. Eine Abnahme der Menge an Melanosphären, die nach dieser Behandlung in primären Melanomzelllinien gebildet werden, wird festgestellt.
Kinase-Assay
In-vitro-Potenzassays
Nach der Anwendung von RO4929097 werden die Aβ-Peptide mittels ECL-Assays unter Verwendung verschiedener Anti-Aβ-Antikörper und eines Origen 1.5 Analysators gemessen. Der murine mAb 4G8 bindet ein Epitop im Aβ-Peptid (innerhalb der Aminosäuren 18–21), das unmittelbar distal zur α-Secretase-Spaltstelle liegt. Der murine mAb G2–10 bindet den C-Terminus, der nach γ-Secretase-vermittelter Spaltung freigelegt wird, um Aminosäure 40 des Aβ40-Peptids zu erzeugen. Der FCA3542-Kaninchenantikörper bindet den C-Terminus, der nach γ-Secretase-vermittelter Spaltung freigelegt wird, um Aminosäure 42 des Aβ42-Peptids zu erzeugen. Der 4G8-mAb wird mit Biotin-LC-sulfo-N-hydroxysuccinimid-ester biotinyliert. Die Antikörper G2–10 und FCA3542 werden mit TAG-N-hydroxysuccinimid-Ester ruthenyliert. Aβ(x-40) wird mit biotinyliertem 4G8 und ruthenyliertem G2–10 detektiert. Aβ(x-42) wird mit biotinyliertem 4G8 und ruthenyliertem FCA3542 detektiert.
In vivo
Die orale Injektion von 3 bis 60 mg/kg RO4929097 einmal täglich oder zweimal täglich an Nacktmäuse, die A549 NSCLC-Xenografts tragen, über 7, 14 oder 21 Tage eines 21-Tage-Schemas führt zu einer signifikanten Tumorzellwachstumshemmung im Vergleich zu Vehikel-behandelten Tieren. Die Tumorzellwachstumshemmungswerte liegen zwischen 66% und 91%. Wenn Mäuse mit 60 mg/kg dieser Verbindung zweimal täglich mit dem 7+/14--Schema behandelt werden, löst die Behandlung anfänglich eine Regression etablierter A549-Tumoren aus. Am Ende des 21-Tage-Zyklus (Tag 47) beträgt die Tumorzellwachstumshemmung immer noch 91% im Vergleich zu Vehikel-Kontrollmäusen. Die Hemmung des Tumorzellwachstums bleibt über 34 Tage nach der Behandlung (Tag 67) verlängert und anhaltend. Am Tag 67 werden diese Mäuse mit der gleichen Dosis dieser Chemikalie für einen zweiten Zyklus (7 Tage) bis Tag 74 erneut behandelt. Wichtig ist, dass die Antitumorwirkungen nach Abschluss der Dosierung bestehen bleiben. Diese Verbindung führt zu einer reduzierten Expression von Genen, die mit der Angiogenese im A549-Xenograft-Modell assoziiert sind. Im Gegensatz dazu zeigt das RO4929097-resistente H460a-Xenograft nur geringe Veränderungen in der Expression dieser Gene, was den In-vivo-Anti-Angiogenese-Wirkmechanismus dieses Wirkstoffs unterstreicht. Bei IL6- und IL8-überexprimierenden Tumoren beeinflusst es die Angiogenese oder die Infiltration von tumorassoziierten Fibroblasten nicht mehr.
Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21315665/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Anwendungen

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot Hey1 Snail / N-cadherin / Twist / E-cadherin Akt / p-Akt / Notch / IGF1R / FBXW7 NICD / Hes1 / Hes3 / Hes5
S1575-WB1
29899322
Growth inhibition assay Cell viability
S1575-viability1
30669546

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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Häufig gestellte Fragen

Frage 1:
How about its half-life?

Antwort:
Its half-life is about 20 hours based on the following paper: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3869895/