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DAPT γ-Sekretase-Inhibitor

Kat.-Nr.S2215

DAPT ist ein neuartiger γ-secretase-Inhibitor, der die Aβ-Produktion mit einem IC50 von 20 nM in HEK 293-Zellen hemmt. DAPT verstärkt die apoptosis menschlicher Zungenkarzinomzellen und reguliert die autophagy.
DAPT Secretase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 432.46

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.99%
99.99

Produkte, die oft zusammen verwendet werden mit DAPT

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Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
Function assay THP1 Displacement of [3H]IN973 from gamma-secretase in human THP1 cells, acvalue. 17932033
GC-B  Growth Inhibition Assay 6.25-100 μM 24 h DMSO inhibits the cell growth in a dose-dependent manner 19542446
U87  Function Assay 2 μM 48 h DMSO blocks t-AUCB-induced activation of the p38 MAPK/MAPKAPK2/Hsp27 pathway and inhibits expression of NICD1 24793313
A549  Growth Inhibition Assay 10 μM 24h decreases the cell viability combined with PTE 23671619
U87  Growth Inhibition Assay 2 μM 48 h DMSO strengthens t-AUCB-induced cell growth suppression 24793313
U251 Function Assay 2 μM 48 h DMSO blocks t-AUCB-induced activation of the p38 MAPK/MAPKAPK2/Hsp27 pathway and inhibits expression of NICD1 24793313
U251 Growth Inhibition Assay 2 μM 48 h DMSO strengthens t-AUCB-induced cell growth suppression 24793313
Saos-2 Function Assay 100 μM 24 h DMSO desensitizes the cell line to cisplatin treatment 24894297
MG63 Function Assay 100 μM 24 h DMSO desensitizes the cell line to cisplatin treatment 24894297
SHG-44 Growth Inhibition Assay 0.5-10 μM 1-5 d inhibits the cell viability at the optimal concentration of 1 μM 25063285
A549 CD133− Growth Inhibition Assay 2 μM 48 h enhances cell growth inhibition induced by CDDP 24502949
A549 CD133+ Growth Inhibition Assay 2 μM 48 h enhances cell growth inhibition induced by CDDP 24502949
HT29  Growth Inhibition Assay 0.5-75 μM 12/24/48 h DMSO inhibits the cell growth in a concentration manner 25257945
Cytotoxicity assay SNU475 72 hrs Cytotoxicity against human SNU475 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Displacement of [3H]IN973 from gamma-secretase in human THP1 cells, acvalue.. ChEMBL
Cytotoxicity assay HuH7 72 hrs Cytotoxicity against human HuH7 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human SNU475 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Displacement of [3H]IN973 from gamma-secretase in human THP1 cells, acvalue... ChEMBL
Cytotoxicity assay Hep3B 72 hrs Cytotoxicity against human Hep3B cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human HuH7 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human SNU475 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Displacement of [3H]IN973 from gamma-secretase in human THP1 cells, acvalue.... ChEMBL
Cytotoxicity assay Mahlavu 72 hrs Cytotoxicity against human Mahlavu cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human Hep3B cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human HuH7 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Cytotoxicity against human SNU475 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by SRB assay, Displacement of [3H]IN973 from gamma-secretase in human THP1 cells, acvalue..... ChEMBL
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 432.46 Formel

C23H26F2N2O4

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 208255-80-5 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme GSI-IX, LY-374973 Smiles CC(C(=O)NC(C1=CC=CC=C1)C(=O)OC(C)(C)C)NC(=O)CC2=CC(=CC(=C2)F)F

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 86 mg/mL (198.86 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 41 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
Notch
Aβ
(HEK 293 cells)
20 nM
In vitro
In primären neuronalen Kulturen des Menschen zeigt DAPT auch hemmende Wirkungen auf die Aβ-Produktion mit IC50-Werten von 115 nM bzw. 200 nM für Aβ gesamt und Aβ42, was 5- bis 10-fach niedriger ist als in HEK 293-Zellen beobachtet. Eine aktuelle Studie zeigt, dass diese Verbindung die Proliferation von SK-MES-1-Zellen konzentrationsabhängig mit einem IC50 von 11,3 μM hemmt. Darüber hinaus induziert sie auch Caspase-abhängige und Caspase-unabhängige apoptosis in Lungenplattenepithelkarzinomzellen durch Hemmung des Notch-Rezeptor-Signalwegs.
Kinase-Assay
In vitro Aβ-Reduktionsassays
Menschliche embryonale Nierenzellen (American Type Culture Collection CRL-1573), transfiziert mit dem Gen für APP751 (HEK 293), werden für routinemäßige Aβ-Reduktionsassays verwendet. Zellen werden in 96-Well-Platten ausgesät und über Nacht in Dulbecco's modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 10 % hitzeinaktiviertem fötalem Kälberserum adhärieren gelassen. DAPT wird aus Stammlösungen in Dimethylsulfoxid (DMSO) verdünnt, um eine Endkonzentration von 0,1 % DMSO im Medium zu erreichen. Zellen werden 2 Stunden lang bei 37 °C mit dieser Verbindung vorbehandelt, das Medium wird abgesaugt und frische Verbindungslösungen werden aufgetragen. Nach einer weiteren Behandlungsdauer von 2 Stunden wird das konditionierte Medium entnommen und mittels eines Sandwich-ELISA (266–3D6), der spezifisch für gesamtes Aβ ist, analysiert. Die Reduktion der Aβ-Produktion wird relativ zu Kontrollzellen gemessen, die mit 0,1 % DMSO behandelt wurden, und als prozentuale Hemmung ausgedrückt. Daten von mindestens sechs Dosen in Duplikaten werden mit der XLfit-Software an ein Vier-Parameter-Logistikmodell angepasst, um die Potenz zu bestimmen. Menschliche und PDAPP-Maus-Neuronen-Kulturen werden in serumfreiem Medium kultiviert, um ihre neuronalen Eigenschaften zu verbessern, und schienen nach der Reifung vor der Verwendung zu über 90 % aus Neuronen zu bestehen. Konditionierte Medien zur Bestimmung der Aβ-Basalwerte werden gesammelt, indem frisches Medium zu jedem Well gegeben und 24 Stunden lang bei 37 °C in Abwesenheit dieser Chemikalie inkubiert wird. Die Kulturen werden dann weitere 24 Stunden bei 37 °C mit frischem Medium, das diese Verbindung in der gewünschten Konzentrationsreihe enthält, behandelt und konditionierte Medien gesammelt. Für die Messung des gesamten Aβ werden die Proben mit demselben ELISA (266–3D6) analysiert, der auch für die HEK 293-Zellassays verwendet wurde. Analysen von Proben auf Aβ42-Produktion werden mit einem separaten ELISA (21F12–3D6) durchgeführt, der einen Fängerantikörper verwendet, der spezifisch für den Aβ42 C-Terminus ist. Die Hemmung der Produktion sowohl des gesamten Aβ als auch des Aβ42 wird durch die Differenz zwischen den Werten für die Verbindung Behandlung und die Basalperioden bestimmt. Nach dem Auftragen der prozentualen Hemmung gegen diese Verbindungskonzentration werden die Daten wie oben mit der XLfit-Software analysiert, um die Potenz zu bestimmen.
In vivo
DAPT-Verabreichung (100 mg/kg) führt zu einem robusten und anhaltenden pharmakodynamischen Effekt bei PDAPP-Mäusen, wobei die Spiegel dieser Verbindung im Gehirn innerhalb von 1 Stunde 100 ng/g überschreiten und bis zu 18 Stunden nach der Verabreichung anhalten, mit Spitzenwerten von 490 ng/g nach 3 Stunden. Und während dieser Periode reduziert diese Chemikalie (100 mg/kg) auch das kortikale Gesamt-Aβ und Aβ42 dosisabhängig um 50 %. In den zerebralen Kortizes von Ratten unterdrückt diese Verbindung (40 mg/kg) die LPS-induzierte Aktivität von γ-secretase und erhöht die Zellapoptose bei verlängerter Neuroinflammation.
Literatur

Anwendungen

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot NICD / Pax7 / Pax3 / MyoD / Myogenin / p21 Bax / caspase-3 / Bcl-2 Snail / N-cadherin / Vimentin / E-cadherin
S2215-WB3
18957511
Growth inhibition assay Cell viability
S2215-viability1
27118928
Immunofluorescence CDK5
S2215-IF1
18662245

Klinische Studieninformationen

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2024-05-22)

NCT-Nummer Rekrutierung Erkrankungen Sponsor/Kooperationspartner Startdatum Phasen
NCT06292117 Recruiting
Ischemic Stroke|CYP2C19 Polymorphism
University of Virginia|American Heart Association
 April 16 2024 --
NCT06074549 Recruiting
Coronary Artery Disease
Elixir Medical Corporation
 March 10 2024 --
NCT06223607 Recruiting
Baseline Thrombocytopenia
Methodist Health System
 August 22 2022 --

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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Häufig gestellte Fragen

Frage 1:
I would like to ask if you would recommend it used in endothelial cells (e.g. both murine and human endothelial cells).

Antwort:
I think this compound can be used in endothelial cells from both human and mouse, please see the following reference: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19481797; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2615564/