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RAF265 (CHIR-265) Raf Inhibitor

Kat.-Nr.S2161

RAF265 (CHIR-265) ist ein potenter selektiver Inhibitor von C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E mit einem IC50 von 3-60 nM und zeigt eine potente Hemmung der VEGFR2-Phosphorylierung mit einem EC50 von 30 nM in zellfreien Assays. Diese Verbindung induziert Zellzyklusarrest und Apoptose. Phase 2.
RAF265 (CHIR-265) Raf Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 518.41

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.98%
99.98

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
SK-MEL-28 Growth inhibition assay Growth inhibition of SK-MEL-28 cells, IC50=0.14μM. 21576023
MALME-3M Growth inhibition assay Growth inhibition of MALME-3M cells, IC50=0.14μM. 21576023
A375M Growth inhibition assay Growth inhibition of A375M cells, IC50=0.14μM. 21576023
A375 Function assay Inhibition of B-RAF V600E mutant in human A375 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM. 26396681
Malme-3M Function assay Inhibition of B-RAF V600E mutant in human Malme-3M cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM. 26396681
WM-1799 Function assay Inhibition of B-RAF V600E mutant in human WM-1799 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM. 26396681
MALME-3M Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human MALME-3M cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM. 26396681
A375 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human A375 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM. 26396681
WM1799 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human WM1799 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM. 26396681
SK-MEL-28 Function assay Inhibition of B-RAF V600E mutant in human SK-MEL-28 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.14μM. 26396681
SK-MEL-28 Antiproliferative assay Antiproliferative activity against human SK-MEL-28 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.16μM. 26396681
A375M Function assay 100 mg/kg fCmin in mouse xenografted with human A375M cells at 100 mg/kg, po q2d, fCmin=0.5μM. 26396681
A375M Function assay 100 mg/kg 48 hrs Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 100 mg/kg, po q24 after 48 hrs by Western blot analysis 26396681
A375M Function assay 100 mg/kg 48 hrs Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 100 mg/kg, po q2d after 48 hrs by Western blot analysis 26396681
A375M Function assay 30 to 100 mg/kg 4 hrs Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 30 to 100 mg/kg, po q2d measured after 4 hrs post-third dose by Western blot analysis 26396681
A375M Antitumor assay 10 to 100 mg/kg 30 days Antitumor activity against human A375M cells xenografted in mouse assessed as tumor regression at 10 to 100 mg/kg, po q2d measured up to 30 days 26396681
TC32 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for TC32 cells 29435139
DAOY qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for DAOY cells 29435139
SJ-GBM2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells 29435139
A673 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
BT-37 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells 29435139
U-2 OS qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for U-2 OS cells 29435139
Saos-2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells 29435139
SK-N-SH qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells 29435139
NB1643 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells 29435139
LAN-5 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells 29435139
BT-12 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-12 cells 29435139
RD qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells 29435139
NB1643 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for NB1643 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SK-N-MC cells 29435139
LAN-5 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for LAN-5 cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for NB-EBc1 cells 29435139
BT-37 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for BT-37 cells 29435139
TC32 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for TC32 cells 29435139
MG 63 (6-TG R) qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for MG 63 (6-TG R) cells 29435139
VERO-E6 Function assay 48 hrs Toxicity CC50 against VERO-E6 cells determined at 48 hours by high content imaging (same conditions as 2_LEY without exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus), CC50=9.19μM. ChEMBL
VERO-E6 Function assay 48 hrs Determination of IC50 values for inhibition of SARS-CoV-2 induced cytotoxicity of VERO-E6 cells after 48 hours exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus by high content imaging, IC50=14.64μM. ChEMBL
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 518.41 Formel

C24H16F6N6O

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 927880-90-8 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles CN1C2=C(C=C(C=C2)OC3=CC(=NC=C3)C4=NC=C(N4)C(F)(F)F)N=C1NC5=CC=C(C=C5)C(F)(F)F

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 100 mg/mL (192.89 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 33 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
VEGFR2
(Cell-free assay)
30 nM(EC50)
B-Raf
(Cell-free assay)
3 nM-60 nM
In vitro
RAF265 (CHIR-265) hemmt C-Raf, Wildtyp B-Raf und mutiertes (V600E) B-Raf. Diese Verbindung blockiert effektiv die Phosphorylierung der nachgeschalteten Substrate von Raf, MEK und ERK, in Zellen und tötet auch Melanom- und Darmkrebszelllinien ab, die B-Raf-Mutationen unabhängig vom PTEN-Mutationsstatus aufweisen. Die Raf-Kinase-Hemmung durch dieses Mittel in mutierten B-Raf-Melanomzelllinien führt zu einem Zellzyklusarrest und induziert Apoptosis, was den Effekt von Raf RNAi in diesen Zellen nachahmt. Es hemmt auch potent die Phosphorylierung von VEGFR2 und die Proliferation von VEGF-stimulierten hMVEC. In HT29- und MDAMB231-Zellen zeigt diese Chemikalie eine hemmende Aktivität mit einer IC20 von 1 bis 3 μM bzw. einer IC50 von 5 bis 10 μM. Während sie zu einem signifikanten Rückgang des klonogenen Überlebens in allen getesteten Zelllinien führt, was bedeutet, dass diese Verbindung einen dominanten Effekt auf das klonogene Überleben induziert. Die Zugabe dieses Mittels zu RAD001 in HCT116-Zellen könnte zu einer moderat verringerten Phosphorylierung von AKT, S6-Protein und 4EBP1 führen. Es reduziert deutlich den Proteingehalt von Bcl-2 und wirkt stark hemmend in CM- und NCI-H727-Zellen, während es keinen Einfluss auf die TRAIL-Empfindlichkeit von BON1- und GOT1-Zellen hat. Proteinkinase D3 (PRKD3), die bei Hemmung die Zellabtötung durch diese Verbindung in A2058-Melanomzellen verstärken könnte, was die Reaktivierung der MAPK-Signalübertragung verhindert, PARP-Spaltung induziert, die Caspase-Aktivität erhöht, die Zellzyklusprogression unterbricht und die Koloniebildung hemmt.
Kinase-Assay
Assay-Protokoll
Raf und Mek werden in 2 × Endkonzentrationen in Assay-Puffer (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA und 1 mM DTT) kombiniert und 15 μL pro Vertiefung in Polypropylen-Assay-Platten dosiert. Hintergrundwerte werden in Vertiefungen bestimmt, die Mek und DMSO ohne Raf enthalten. Zu den Raf/Mek-haltigen Vertiefungen werden 3 μL dieser Verbindung, 10 × in 100 % DMSO verdünnt, hinzugefügt. Die Raf-Kinase-Aktivitätsreaktion wird durch die Zugabe von 12 μL pro Vertiefung von 2,5 × 33P-ATP, verdünnt in Assay-Puffer, gestartet. Nach 45–60 Minuten werden die Reaktionen durch Zugabe von 70 μL Stoppreagenz (30 mM EDTA) gestoppt. Filtrationsplatten werden 5 Minuten lang mit 70 % Ethanol vorgewässert und dann durch Filtration mit Waschpuffer gespült. Proben (90 μL) aus den Reaktionsvertiefungen werden dann auf die Filtrationsplatten überführt. Die Filtrationsplatten werden 6 × mit Waschpuffer unter Verwendung eines Millipore-Filtrationsapparates gewaschen. Die Platten werden getrocknet und 100 μL pro Vertiefung Szintillationsflüssigkeit hinzugefügt. Die CPM wird dann mit einem Wallac Microbeta 1450-Lesegerät bestimmt.
In vivo
RAF265 (CHIR-265) zeigt 71 % bis 72 % TVI% (Hemmung des Tumorvolumens) in HCT116-Xenotransplantaten bei 12 mg/kg. Die Kombination dieser Verbindung und RAD001 zeigt eine verstärkte Antitumoraktivität mit erhöhtem T10 (Zeit, um ein relatives Tumorvolumen des 10-fachen des anfänglichen Tumorvolumens zu erreichen) und einer Verzögerung des Tumorwachstums. Die Kombination von RAD001 und dieser Chemikalie verstärkt auch signifikant die Aktivierung von Caspase-3 in HCT116 und MDAMB231, jedoch nicht in A549-Xenotransplantaten. Diese Verbindung hemmt die FDG-Akkumulation (2-Desoxy-2-[18F]fluor-d-glucose) und verringert die Tumorvolumina in A375M-Xenotransplantaten bei oraler Verabreichung von 100 mg/kg.
Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Klinische Studieninformationen

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2024-05-22)

NCT-Nummer Rekrutierung Erkrankungen Sponsor/Kooperationspartner Startdatum Phasen
NCT01352273 Completed
Advanced Solid Tumors
Array Biopharma now a wholly owned subsidiary of Pfizer|Array BioPharma
 June 2011 Phase 1

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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