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CHIR-124 Chk Inhibitor

Kat.-Nr.: S2683

CHIR-124 ist ein neuartiger und potenter Chk1-Inhibitor mit einer IC50 von 0,3 nM in einem zellfreien Assay. Er zeigt eine 2.000-fache Selektivität gegenüber Chk2 und eine 500- bis 5.000-fach geringere Aktivität gegenüber CDK2/4 und Cdc2.
CHIR-124 Chk Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 419.91

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.48%
99.48

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells, EC50=0.08 μM
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells in presence of camptothecin
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 419.91 Formel

C23H22ClN5O

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 405168-58-3 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles C1CN2CCC1C(C2)NC3=C(C(=O)NC4=C3C=C(C=C4)Cl)C5=NC6=CC=CC=C6N5

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : Insoluble
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Chk1
(Cell-free assay)
0.3 nM
FLT3
(Cell-free assay)
5.8 nM
PDGFR
(Cell-free assay)
6.6 nM
GSK-3
(Cell-free assay)
23.3 nM
In vitro

CHIR-124 is a quinolone-based small molecule that is structurally unrelated to other known inhibitors of Chk1. This compound interacts synergistically with topoisomerase poisons (e.g., Camptothecin or SN-38) in causing growth inhibition in a variety of cancer cell lines, including breast carcinoma (MDA-MB-231 and MDA-MB-435) and colon carcinoma (SW-620 and Colo205), all of which contains the mutant p53 gene. It abrogates the SN-38-induced S and G2-M checkpoints and potentiates apoptosis in MDA-MD-435 breast cancer cells. The abrogation of the G2-Mcheckpoint and induction of apoptosis by this chemical are enhanced by the loss of p53. This compound also potently targets other kinases such as PDGFR and Flt3 with IC50 of 6.6 nM and 5.8 nM, respectively.

Kinase-Assay
Chk1 Assay
Für den Chk1 Assay wird die Kinasedomäne in Sf9-Insektenzellen exprimiert, und ein biotinyliertes cdc25c-Peptid, das die Konsensus-Chk1/Chk2-Phosphorylierungsstelle (*) (Biotin-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]) enthält, wird als Substrat verwendet. Eine Verdünnungsreihe von CHIR-124 wird mit einem Kinase-Reaktionspuffer gemischt, der eine Endkonzentration von 30 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM β-Glycerophosphat, 5 mM MnCl2, 0,01% Rinderserumalbumin, 1,35 nM CHK1-Kinasedomäne, 0,5 μM Peptidsubstrat und 1 AM unmarkiertes ATP plus 5 nM 33Pγ-markiertes ATP (spezifische Aktivität = 2.000 Ci/mmol) enthält. Reaktionen und der Nachweis des Phosphattransfers werden mit einer radioaktiven Methode durchgeführt. Die Reaktionen werden 1 bis 4 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert und das phosphorylierte Peptid auf Streptavidin-beschichteten Mikrotiterplatten, die einen Stopp-Reaktionspuffer (25 mM EDTA [Ethylendiamintetraessigsäure], 50 mM HEPES, pH 7,5) enthalten, eingefangen. Phosphoryliertes Peptid wird mit dem DELFIA TRF-System unter Verwendung eines Europium-markierten Anti-Phosphotyrosin-Antikörpers PT66 gemessen. Die Konzentration dieser Verbindung für IC50 wird mittels nichtlinearer Regression mit der XL-Fit-Datenanalysesoftware berechnet.
In vivo

CHIR-124 potentiates the growth inhibitory effects by abrogating the G2-M checkpoint and increasing tumor apoptosis in an orthotopic breast cancer xenograft model.
Literatur