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GSK1070916 Aurora Kinase Inhibitor

Kat.-Nr.S2740

GSK1070916 ist ein reversibler und ATP-kompetitiver Inhibitor von Aurora B/C mit einem IC50 von 3,5 nM/6,5 nM. Er zeigt eine >100-fache Selektivität gegenüber dem eng verwandten Aurora A-TPX2-Komplex. Phase 1.
GSK1070916 Aurora Kinase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 507.63

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Qualitätskontrolle

Charge: Reinheit: 99.79%
99.79

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
A549 cells Proliferation assay 6-7 d Antiproliferative activity against human A549 cells after 6 to 7 days by celltiter-glo luminescence assay in absence of 70% human serum albumin, EC50=0.007 μM
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität

Molekulargewicht 507.63 Formel

C30H33N7O

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 942918-07-2 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles CCN1C=C(C(=N1)C2=CC=C(C=C2)NC(=O)N(C)C)C3=C4C=C(NC4=NC=C3)C5=CC=CC(=C5)CN(C)C

Löslichkeit

In vitro
Charge:

DMSO : 102 mg/mL (200.93 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 102 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus

Targets/IC50/Ki
Aurora B-INCENP
(Cell-free assay)
3.5 nM
Aurora C-INCENP
(Cell-free assay)
6.5 nM
FLT1
(Cell-free assay)
42 nM
Tie-2
(Cell-free assay)
59 nM
SIK
(Cell-free assay)
70 nM
FLT4
(Cell-free assay)
74 nM
FGFR1
(Cell-free assay)
76 nM
In vitro
GSK1070916 hemmt selektiv Aurora B und Aurora C mit Ki von 0,38 nM bzw. 1,5 nM gegenüber Aurora A mit Ki von 490 nM. Die Hemmung von Aurora B und Aurora C durch diese Verbindung ist zeitabhängig, mit einer Dissoziationshalbwertszeit des Enzym-Inhibitor-Komplexes von >480 min bzw. 270 min. Darüber hinaus ist es auch ein kompetitiver Inhibitor in Bezug auf ATP. Menschliche Tumorzellen, die mit diesem Inhibitor behandelt wurden, zeigen eine dosisabhängige Hemmung der Phosphorylierung an Serin 10 von Histon H3, einem Substrat, das spezifisch für Aurora B ist. Darüber hinaus hemmt es die Proliferation von Tumorzellen mit EC50-Werten von <10 nM in über 100 Zelllinien, die ein breites Spektrum von Tumortypen umfassen, mit einem medianen EC50 von 8 nM. Obwohl diese Verbindung eine potente Aktivität gegen proliferierende Zellen aufweist, wird eine dramatische Verschiebung der Potenz in primären, nicht-teilenden, normalen menschlichen Venenendothelzellen beobachtet. Darüber hinaus arretieren mit diesem Mittel behandelte Zellen nicht in der Mitose, sondern teilen sich stattdessen nicht und werden polyploid, was letztendlich zur Apoptose führt. In einer anderen Studie wird auch berichtet, dass eine hohe Chromosomenzahl, die mit der Resistenz gegenüber der Hemmung von Aurora B und C verbunden ist, darauf hindeutet, dass Zellen mit einem Mechanismus zur Umgehung des Hochploidie-Checkpoints resistent gegen diese Chemikalie sind.
Kinase-Assay
Kinase-Assay
Die Fähigkeit von GSK1070916, die Aurora-Enzyme zu hemmen, wird mittels in vivo Kinase-Assays gemessen. Die Assays messen die Fähigkeit von Aurora A, Aurora B und Aurora C, ein synthetisches Peptidsubstrat zu phosphorylieren. Biotin-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2 wird für den Aurora A–TPX2 LEADseekerTM-Assay verwendet und 5FAM-PKAtide wird für den IMAPTM-Assay für alle drei Aurora Kinasen verwendet. Um die zeitabhängige Hemmung von Aurora-Enzymen zu berücksichtigen, werden Aurora A–TPX2, Aurora B–INCENP und Aurora C–INCENP mit dieser Verbindung in verschiedenen Konzentrationen 30 min lang inkubiert, bevor die Reaktionen durch Zugabe der Substrate initiiert werden. Für den Aurora A LEADseekerTM-Assay sind die endgültigen Assay-Bedingungen 0,5 nM Aurora A–TPX2, 1 μM Peptidsubstrat, 6 mM MgCl2, 1,5 μM ATP, 0,003 μCi/μL [γ-33P] ATP in 50 mM Hepes, pH 7,2, 0,15 mg/mL BSA, 0,01 % Tween-20, 5 mM DTT und 25 mM KCl. Die Reaktionen werden bei Raumtemperatur (25 °C) 120 min lang inkubiert und durch Zugabe von LEADseekerTM-Beads in PBS mit EDTA (Endkonzentration 2 mg/mL Beads und 25 mM EDTA) beendet. Die Platten werden dann versiegelt und die Beads über Nacht absetzen lassen. Die Produktbildung wird mit einem Viewlux Imager quantifiziert. Für die IMAPTM-Assays werden Aurora A–TPX2 (Endkonzentration 1 nM), Aurora B–INCENP (Endkonzentration 2 nM) oder Aurora C–INCENP (Endkonzentration 2,5 nM) zu den Verbindung-enthaltenden Platten in 5 μL Puffer (25 mM Hepes, pH 7,2, für Aurora A, 25 mM Hepes, pH 7,5, für Aurora B und 20 mM Hepes, pH 7,2, für Aurora C) gegeben, der 0,15 mg/mL BSA, 0,01 % Tween 20 und 25 mM NaCl enthält. Diese Mischung wird 30 min lang bei Raumtemperatur inkubiert. Um die Reaktion zu starten, werden 5 μL einer Substratlösung zugegeben, die den gleichen Hepes-Puffer wie für die Vorinkubation, 25 mM NaCl, MgCl2 (2, 4 und 4 mM für Aurora A, B bzw. C), DTT (4, 4 und 2 mM für Aurora A, B bzw. C), ATP (4, 4 und 10 μM für Aurora A, B bzw. C), 200 nM 5FAM-PKAtide, 0,01 % Tween 20 und 0,15 mg/mL BSA enthält. Die Reaktionen werden für Aurora A und B 120 min und für Aurora C 60 min bei Raumtemperatur inkubiert. Diese Reaktionen werden dann durch Zugabe von 10 μL 1:500 (1:600 für Aurora C) Progressive Binding Reagent in 95 % Progressive Binding Buffer A und 5 % Progressive Binding Buffer B beendet. Die Platten werden bei Raumtemperatur für ca. 90–120 min inkubiert (Zeit, die zum Erreichen des Gleichgewichts erforderlich ist). Die Platten werden in einem Molecular Devices Analyst Plattenleser im Fluoreszenzpolarisationsmodus abgelesen.
In vivo
GSK1070916 (25, 50 oder 100 mg/kg) zeigt eine dosisabhängige Hemmung der Phosphorylierung eines Aurora B-spezifischen Substrats bei Mäusen und, im Einklang mit seiner breiten zellulären Aktivität, hat diese Verbindung Antitumorwirkungen in 10 humanen Tumor-Xenograft-Modellen, einschließlich Brust-, Darm-, Lungen- und zwei Leukämiemodellen.
Literatur

Technischer Support

Handhabungshinweise

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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