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GSK1070916 Aurora Kinase Inhibitor

Kat.-Nr.: S2740

GSK1070916 ist ein reversibler und ATP-kompetitiver Inhibitor von Aurora B/C mit einem IC50 von 3,5 nM/6,5 nM. Er zeigt eine >100-fache Selektivität gegenüber dem eng verwandten Aurora A-TPX2-Komplex. Phase 1.
GSK1070916 Aurora Kinase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 507.63

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.79%
99.79

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
A549 cells Proliferation assay 6-7 d Antiproliferative activity against human A549 cells after 6 to 7 days by celltiter-glo luminescence assay in absence of 70% human serum albumin, EC50=0.007 μM
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 507.63 Formel

C30H33N7O

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 942918-07-2 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles CCN1C=C(C(=N1)C2=CC=C(C=C2)NC(=O)N(C)C)C3=C4C=C(NC4=NC=C3)C5=CC=CC(=C5)CN(C)C

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 102 mg/mL (200.93 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 102 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Aurora B-INCENP
(Cell-free assay)
3.5 nM
Aurora C-INCENP
(Cell-free assay)
6.5 nM
FLT1
(Cell-free assay)
42 nM
Tie-2
(Cell-free assay)
59 nM
SIK
(Cell-free assay)
70 nM
FLT4
(Cell-free assay)
74 nM
FGFR1
(Cell-free assay)
76 nM
In vitro
GSK1070916 selectively inhibits Aurora B and Aurora C with Ki of 0.38 nM and 1.5 nM over Aurora A with Ki of 490 nM. Inhibition of Aurora B and Aurora C by this compound is time-dependent, with an enzyme-inhibitor dissociation half-life of >480 min and 270 min respectively. In addition, it is also a competitive inhibitor with respect to ATP. Human tumor cells treated with this inhibitor shows dose-dependent inhibition of phosphorylation on serine 10 of Histone H3, a substrate specific for Aurora B. Moreover, it inhibits the proliferation of tumor cells with EC50 values of <10 nM in over 100 cell lines spanning a broad range of tumor types, with a median EC50 of 8 nM. Although this compound has potent activity against proliferating cells, a dramatic shift in potency is observed in primary, nondividing, normal human vein endothelial cells. Furthermore, cells treated with this agent do not arrest in mitosis but instead fails to divide and become polyploid, ultimately leading to apoptosis. In another study, it is also reported high chromosome number associated with resistance to the inhibition of Aurora B and C suggests cells with a mechanism to bypass the high ploidy checkpoint are resistant to this chemical.
Kinase-Assay
Kinase-Assay
Die Fähigkeit von GSK1070916, die Aurora-Enzyme zu hemmen, wird mittels in vivo Kinase-Assays gemessen. Die Assays messen die Fähigkeit von Aurora A, Aurora B und Aurora C, ein synthetisches Peptidsubstrat zu phosphorylieren. Biotin-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2 wird für den Aurora A–TPX2 LEADseekerTM-Assay verwendet und 5FAM-PKAtide wird für den IMAPTM-Assay für alle drei Aurora Kinasen verwendet. Um die zeitabhängige Hemmung von Aurora-Enzymen zu berücksichtigen, werden Aurora A–TPX2, Aurora B–INCENP und Aurora C–INCENP mit dieser Verbindung in verschiedenen Konzentrationen 30 min lang inkubiert, bevor die Reaktionen durch Zugabe der Substrate initiiert werden. Für den Aurora A LEADseekerTM-Assay sind die endgültigen Assay-Bedingungen 0,5 nM Aurora A–TPX2, 1 μM Peptidsubstrat, 6 mM MgCl2, 1,5 μM ATP, 0,003 μCi/μL [γ-33P] ATP in 50 mM Hepes, pH 7,2, 0,15 mg/mL BSA, 0,01 % Tween-20, 5 mM DTT und 25 mM KCl. Die Reaktionen werden bei Raumtemperatur (25 °C) 120 min lang inkubiert und durch Zugabe von LEADseekerTM-Beads in PBS mit EDTA (Endkonzentration 2 mg/mL Beads und 25 mM EDTA) beendet. Die Platten werden dann versiegelt und die Beads über Nacht absetzen lassen. Die Produktbildung wird mit einem Viewlux Imager quantifiziert. Für die IMAPTM-Assays werden Aurora A–TPX2 (Endkonzentration 1 nM), Aurora B–INCENP (Endkonzentration 2 nM) oder Aurora C–INCENP (Endkonzentration 2,5 nM) zu den Verbindung-enthaltenden Platten in 5 μL Puffer (25 mM Hepes, pH 7,2, für Aurora A, 25 mM Hepes, pH 7,5, für Aurora B und 20 mM Hepes, pH 7,2, für Aurora C) gegeben, der 0,15 mg/mL BSA, 0,01 % Tween 20 und 25 mM NaCl enthält. Diese Mischung wird 30 min lang bei Raumtemperatur inkubiert. Um die Reaktion zu starten, werden 5 μL einer Substratlösung zugegeben, die den gleichen Hepes-Puffer wie für die Vorinkubation, 25 mM NaCl, MgCl2 (2, 4 und 4 mM für Aurora A, B bzw. C), DTT (4, 4 und 2 mM für Aurora A, B bzw. C), ATP (4, 4 und 10 μM für Aurora A, B bzw. C), 200 nM 5FAM-PKAtide, 0,01 % Tween 20 und 0,15 mg/mL BSA enthält. Die Reaktionen werden für Aurora A und B 120 min und für Aurora C 60 min bei Raumtemperatur inkubiert. Diese Reaktionen werden dann durch Zugabe von 10 μL 1:500 (1:600 für Aurora C) Progressive Binding Reagent in 95 % Progressive Binding Buffer A und 5 % Progressive Binding Buffer B beendet. Die Platten werden bei Raumtemperatur für ca. 90–120 min inkubiert (Zeit, die zum Erreichen des Gleichgewichts erforderlich ist). Die Platten werden in einem Molecular Devices Analyst Plattenleser im Fluoreszenzpolarisationsmodus abgelesen.
In vivo
GSK1070916 (25, 50, or 100 mg/kg) shows dose-dependent inhibition of phosphorylation of an Aurora B–specific substrate in mice and consistent with its broad cellular activity, this compound has antitumor effects in 10 human tumor xenograft models including breast, colon, lung, and two leukemia models.
Literatur